抗體純化磁珠 1.抗體純化磁珠試劑盒是否可以重復(fù)使用,？ 答：不推薦重復(fù)使用，不同樣本之間容易造成污染,。 2.若體系中含有木瓜蛋白酶,，是否影響磁珠的使用？ 答：木瓜蛋白酶是一種蛋白水解酶,，目前對(duì)protein A的影響未知,，建議客戶慎用。 3.1mL抗體純化磁珠能夠用多少次? 答：1mL磁珠能夠結(jié)合1.5-2.0mg抗體,，客戶需要根據(jù)結(jié)合抗體的量來確定使用磁珠的量,。 4.試劑盒中的緩沖液用完后，能否告知配方,？ 答：試劑盒中緩沖液的成分都是保密的,。可以采用以下的緩沖液進(jìn)行替代,。 結(jié)合緩沖液:PBST 150mM PBS,，150mM NaCl，0.1% (v/v) Tween-20,，pH7.2 洗脫緩沖液:甘氨酸緩沖液 0.1M Glycine,，0.1% (v/v) Tween-20，pH2.5（該緩沖液適合于耐酸性的抗體）,。 0.1M Glycine,，3M MgCl2 (4M protein A/G) ,，0.1% (v/v) Tween-20，pH4.5（該溶液含較高濃度的鹽,，不可直接進(jìn)行SDS-PAGE,。可以用透析或超濾的方法去除過多的鹽）,。 保存緩沖液： 50mM Tris-HCl,，0.1%(v/v) Tween-20，0.01%(w/v) NaN3,，pH7.5 洗滌緩沖液： 50mM Tris-HCl,，0.1%(v/v) Tween-20，pH7.5） 再生緩沖液： 1% (v/v) TritonX-100 His ,gst,strep標(biāo)簽蛋白純化及檢測,。湖南抗體純化試劑代理廠家

金屬螯合親合層析,，是一種新型的應(yīng)用于原**白純化的技術(shù)。該方法通過蛋白質(zhì)表面的一些特殊的氨基酸,，使之與金屬離子發(fā)生相互作用,，從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行親和純化。這些作用包括配價(jià)鍵結(jié)合,、靜電吸附,、共價(jià)鍵結(jié)合等，其中以6個(gè)組氨酸殘基組合的融合標(biāo)簽（His-Tag）在原**白表達(dá)中的應(yīng)用**為***,。His-Tag可結(jié)合在目的蛋白的C末端或N末端,，形成特殊的結(jié)構(gòu)，以便于進(jìn)行下一步的純化及檢測,。由于金屬螯合親合層析具有配體簡單,、吸附量大、分離條件溫和,、通用性強(qiáng)等特點(diǎn),，所以可選擇范圍廣，高鹽,，存在變性劑以及去垢劑的上樣條件下進(jìn)行純化,，His-Tag正逐漸成為分離純化蛋白質(zhì)等生物工程產(chǎn)品***的技術(shù)之一。選試劑到楚知上海分子生物酶試劑哪種品牌好生物素標(biāo)簽純化方案,。

試劑篇：三,、根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)進(jìn)行分離蛋白質(zhì)純化流程1、電泳法：各種蛋白質(zhì)在同一pH條件下,，因分子量和電荷數(shù)量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開,。值得重視的是等電聚焦電泳，這是利用一種兩性電解質(zhì)作為載體，電泳時(shí)兩性電解質(zhì)形成一個(gè)由正極到負(fù)極逐漸增加的pH梯度,，當(dāng)帶一定電荷的蛋白質(zhì)在其中泳動(dòng)時(shí),，到達(dá)各自等電點(diǎn)的pH位置就停止，此法可用于分析和制備各種蛋白質(zhì),。2,、離子交換層析法：離子交換劑有陽離子交換劑（如：羧甲基纖維素；CM-纖維素）和陰離子交換劑（二乙氨基乙基纖維素）,，當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí),，帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,，隨后用改變pH或離子強(qiáng)度辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來,。

磁珠法口腔拭子基因組提取試劑盒可以快速地從口腔拭子中提取高質(zhì)量DNA。提取出的基因組 DNA A260/A280 典型的比值達(dá) 1.7-1.9,，產(chǎn)物可用于PCR,、載體構(gòu)建、核酸雜交等下游實(shí)驗(yàn),。 

磁珠法口腔拭子基因組提取試劑盒組成

試劑名稱      50T      200T

Buffer A        5ml     20ml

Buffer B        10ml    40ml

蛋白酶K        500μl     2ml

磁珠              10ml      40ml

Wash Buffer  125ml     100ml

Elution Buffer  5ml        20m

l2.問題及解決方案

提不到DNA或產(chǎn)量很低取樣量少：取樣前半小時(shí)漱口,。樣品保存不當(dāng)：確保樣品新鮮有效?？赡軟]加入ProteinaseK,，或加入量不足，導(dǎo)致細(xì)胞裂解不完全,，或者65℃孵育時(shí)間過短,。   2.DNA未完全回收：減少上樣量或增加磁珠量，確保樣品充分吸附,。確保磁珠與樣品充分混勻,，吸附時(shí)磁珠一直保持懸浮狀態(tài)。3洗脫液中無/很少DNA：確保Washbuffer中加入相應(yīng)的乙醇,，用完后要密封保存,，防止揮發(fā)。確保洗脫液中的鹽濃度和pH,。洗脫液用量不當(dāng)：調(diào)整洗脫液體積,。磁珠風(fēng)干時(shí)間太長，磁珠未完全分散,。4,，DNA純度不高，有污染RNA污染：檢查RNase是否有問題,，適當(dāng)增加RNase的用量,。洗雜不充分，含有雜質(zhì),。若用去離子水洗脫DNA,，A260/280比值會(huì)偏低,，但并不表示純度低。 純化過程中如何洗脫,？

蛋白純化試劑產(chǎn)品介紹：HA標(biāo)簽是人流感血凝素的第98-106氨基酸序列YPYDVPDYA,，對(duì)外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小,容易構(gòu)建成標(biāo)簽蛋白融合到蛋白N端或者C端，因此常被用于重組蛋白的融合表達(dá),。Anti-HAAntibody能夠特異性識(shí)別HA標(biāo)簽,，從而用于融合蛋白的表達(dá)和定位檢測?？贵w來源：小鼠交叉反應(yīng)：HA標(biāo)簽融合蛋白克隆類型：單克隆抗體亞型：IgG2A來源：293細(xì)胞表達(dá)的重組抗體純化方式：rProteinA親和純化產(chǎn)品純度：≥95%,，SDS-PAGE檢測儲(chǔ)存緩沖液：1×PBS(pH7.4)，0.02%疊氮鈉,，50%甘油儲(chǔ)存條件：干冰運(yùn)輸,，-20℃可保存一年，避免反復(fù)凍融-上海楚知生物常規(guī)陽離子交換介質(zhì)推薦 SP Beads 6FF,。河南抗體純化試劑怎么樣

含MBP標(biāo)簽蛋白的親和純化介質(zhì),。湖南抗體純化試劑代理廠家

蛋白純化試劑抗體純化rProtein A/G Beads 4FF純化流程，樣品準(zhǔn)備上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值,，可以用平衡/洗雜液對(duì)血清樣品,、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用平衡/洗雜液透析,。對(duì)于100mm培養(yǎng)皿中的貼壁細(xì)胞,，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，使用預(yù)冷PBS洗滌一次后加入2ml細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,。對(duì)于懸浮細(xì)胞,，離心收集細(xì)胞后，PBS洗滌一次后參考貼壁細(xì)胞的裂解方法進(jìn)行裂解,。植物或動(dòng)物組織樣品可以使用液氮研磨方法裂解,。具體的裂解方法請(qǐng)參考不同裂解液的使用說明，裂解液**終總蛋白濃度選擇在0.5-1μg/μl范圍內(nèi)較為合適,。通常針對(duì)目標(biāo)蛋白的表達(dá)量不同,，需要對(duì)總蛋白濃度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整。2.3.去除非特異性結(jié)合（可省略）1)取200微升至1毫升蛋白樣品,，加入約1微克和免疫沉淀時(shí)使用的IgG種屬相同的3/5常州天地人和生物科技有限公司NormalIgG和20微升充分重懸的rProteinA/GBeads4FF,，4℃緩慢搖動(dòng)30分鐘。2)2500rpm(約1000g)離心1分鐘,，取上清用于后續(xù)的免疫沉淀,。注：哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)有多種成分可以和IgG發(fā)生結(jié)合，可能會(huì)在后續(xù)免疫印跡中出現(xiàn)非特異性條帶。使用normalIgG和rProteinA/GBeads4FF對(duì)裂解液預(yù)處理可以降低非特異性吸附,。湖南抗體純化試劑代理廠家

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