避免過度濃縮,，體積越小,，越容易因表面吸附而損失得率,。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,，必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面，有助于減少膜表面吸附,，能提高回收率,。盡量避免Tips接觸膜表面。離心管是一個(gè)簡(jiǎn)單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀,。超濾離心管會(huì)有一個(gè)類似于內(nèi)管和外管的兩個(gè)部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當(dāng)高速離心時(shí),分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了,分子量比它大的就截留在上面（即內(nèi)管中）,就是超濾的原理.常用于濃縮樣品,。 超濾離心管通常不需要預(yù)處理即可使用，不過對(duì)于蛋白質(zhì)樣本處理,，特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的,。超濾離心管可以有效地去除溶液中的雜質(zhì)，使樣品更純凈,。山東小型超濾離心管咨詢

超濾管采用其特有的再生纖維素膜,，定義為：一個(gè)確定NMWL 的超濾膜應(yīng)該截留至少90% 以上的這個(gè)大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的再生纖維素膜得率超過90%,。請(qǐng)仔細(xì)查看以下默克生命科學(xué)官方數(shù)據(jù)：(以0.5mL的AU0.5為例,，其它型號(hào)截留分子量的選擇原則一致，具體離心力和離心時(shí)間不同,。截留分子量選小啦,！看到這個(gè)表，你是否發(fā)現(xiàn)原來抱怨超濾管流速偏慢的根源來自對(duì)于截留分子量定義的誤解,。膜孔徑要小于目的分子這是一原則,。如果分子有近似球形的立體結(jié)構(gòu)(而非明顯的線性分子)，在再生纖維素超濾膜體系內(nèi),，選擇“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超濾管是較佳選擇,，這樣操作起來又快又好，既保證了樣品回收率,，又縮短了離心時(shí)間,，大幅降低大分子損傷風(fēng)險(xiǎn)。嘉興再生纖維素離心管廠家電話使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意保持樣品干燥,、無污染和清潔,。

當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí)，取50ul緩沖溶液,，加入10ul流穿,，看有沒變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白,。如果管漏了,，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,，用5mgml的BSA離心10min,，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作,，防止蛋白受熱）,，直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,，導(dǎo)致堵管,。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因,，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,；前者可用多根超濾管同時(shí)超濾，降低濃度的辦法解決,，后者的方法是換不同的緩沖溶液,，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止,。

蛋白質(zhì)濃縮和替代緩沖液常用的超濾管,，微孔(mwco10kd)常用的micon-ultra-15超濾管。根據(jù)靶蛋白的分子量,、濃縮前的體積和濃縮的靶體積,，還可提供不同尺寸和尺寸的其他類型的mwco超濾管。它可以重復(fù)使用,。1,。選擇合適的超濾管主要考慮分子量和濃度。通常靶蛋白的分子量不應(yīng)大于靶蛋白分子量的1/3,。例如,，當(dāng)靶蛋白的分子量為35kDa時(shí)，可以選擇靶蛋白分子量為10kDa的超濾管,。如果靶蛋白的分子量約為10kd,，則可使用分子量為3kd的超濾管。2,。新購買的超濾是干燥的,。使用前加入Milliq水。水的體積完全覆蓋在膜上,，冰浴或冰箱被預(yù)先冷卻幾分鐘,。倒出水后，可以加入蛋白質(zhì)溶液,。蛋白質(zhì)添加量不超過管頂白線,。超濾管在加入蛋白質(zhì)溶液前需要在冰上預(yù)先冷卻。三,。平衡,。使用超濾離心管時(shí)，應(yīng)注意控制轉(zhuǎn)速，以避免過度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致超濾膜損壞或溢出樣品,。

離心機(jī)的加速度調(diào)至較低檔,，減小對(duì)膜的壓力。注意,，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,，方可離開離心機(jī)，否則離心機(jī)出問題時(shí),，無法一時(shí)間處理,。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直）。在實(shí)際使用中,，一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,，這樣可以延長離心管的使用壽命。當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),，取50ul緩沖溶液,，加入10ul流穿，看有沒變藍(lán)色,，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白,。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要精確判斷是否漏管,，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿,，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè),，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱）,，直到所有濃縮液都加完為止,。使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意避免過度旋轉(zhuǎn)造成樣品變性或降解，并影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。北京再生纖維素離心管咨詢

超濾離心管利用超濾膜的過濾作用將目標(biāo)物質(zhì)從混合物中分離出來,。山東小型超濾離心管咨詢

我們通常會(huì)以1/3到1/6甚至更低的區(qū)間來選擇超濾管的孔徑，通常更小的孔徑會(huì)使回收率提高但是超濾的時(shí)間也會(huì)比較長,。一定范圍內(nèi),，超濾的回收率和速度是一對(duì)矛盾體，因此可以通過優(yōu)化孔徑的選擇,，在回收率可以接受的條件下選擇較大的孔徑,，來提高超濾的速度。低溫如< 10 ℃,，液體的粘度會(huì)增加,，流動(dòng)性會(huì)降低,，因此液體的跨膜速率也會(huì)降低。適當(dāng)提高超濾溫度,，往往能夠提高超濾的速度,。有些客戶需要做幾十ml到幾百ml樣品的濃縮或者緩沖液置換，但是卻使用1支或幾支15ml的超濾管反復(fù)離心來完成操作,，這樣必然造成時(shí)間上的浪費(fèi),。怎么辦？一定要挑選適合處理量的產(chǎn)品,，減少不必要的反復(fù)離心從而提升超濾的效率,。山東小型超濾離心管咨詢