聚合酶鏈式反應是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術,。工具/原料：擴增緩沖液，四種dNTP,，引物,，模板DNA，Taq DNA聚合酶,， Mg離子,，蒸餾水。模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,，使之成為單鏈，以便它與引物結合,，為下輪反應作準備,；模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后,，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合,；引物的延伸：DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,，以dNTP為反應原料，靶序列為模板,，按堿基配對與半保留復制原理,，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程,，就可獲得更多的“半保留復制鏈”,，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。聚合酶鏈反應非常敏感,，有可能產生數百萬到數十億份特定產品的拷貝,，用于測序、克隆和分析,。廣州組織RT-PCR檢測技術應用

聚合酶鏈反應：熱啟動聚合酶鏈式反應:一種在PCR的初始建立階段減少非特異性擴增的技術,。它可以通過將反應組分加熱到變性溫度(例如95 c)在加入聚合酶。[36]已經開發(fā)了特殊的酶系統,，通過結合抗體來抑制聚合酶在環(huán)境溫度下的活性[37][37]或者通過共價鍵結合的抑制劑的存在,，該抑制劑在高溫活化步驟后解離。熱啟動/冷完成聚合酶鏈反應是通過新的雜合聚合酶實現的,，這些酶在環(huán)境溫度下不活躍,，在伸長溫度下立即。序列間特異性聚合酶鏈反應(ISSR):一種用于DNA指紋識別的聚合酶鏈反應方法,，它放大簡單重復序列之間的區(qū)域,，以產生擴增片段長度的獨特指紋。電子聚合酶鏈反應(數字聚合酶鏈反應,、虛擬聚合酶鏈反應,、電子聚合酶鏈反應、電子聚合酶鏈反應)是指計算工具使用給定的一組引物 ( 探針)來擴增來自測序的基因組或轉錄組的DNA 序列,，用于計算理論聚合酶鏈反應結果,。電子PCR被提出作為分子生物學的教育工具。廣州組織RT-PCR檢測技術應用逆轉錄聚合酶鏈反應(逆轉錄-聚合酶鏈反應)：用于從RNA中擴增DNA,。

聚合酶鏈式反應的特點：靈敏度高：PCR產物的生成量是以指數方式增加的,，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,；在病毒的檢測中,，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位）,；在細菌學中很小檢出率為3個細菌,。簡便,、快速：PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后,，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,，不一定要用同位素,，無放射性污染、易推廣,。純度要求低：不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,，DNA 粗制品及RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細胞、活組織等DNA擴增檢測,。

聚合酶鏈反應的一個主要限制是,，為了產生允許其選擇性擴增的引物，需要關于目標序列的先前信息,。這意味著,，通常情況下，PCR用戶必須知道兩個單鏈模板中每個模板上目標區(qū)域上游的精確序列,，以確保DNA聚合酶正確結合引物-模板雜交體,，并隨后在DNA合成過程中產生整個目標區(qū)域。像所有酶一樣,，DNA聚合酶也容易出錯,，這反過來會導致產生的PCR片段發(fā)生突變。PCR的另一個限制是,，即使是很少量的污染DNA也可以被擴增,，導致誤導或模糊的結果。為了很大限度地減少污染的可能性,，調查人員應該為試劑制備,、聚合酶鏈反應和產品分析預留單獨的房間。試劑應分配到一次性的等分試樣中,。應經常使用帶有一次性柱塞和超長移液器吸頭的移液器,。流聚合酶鏈反應：一種偽等溫PCR方法。

聚合酶鏈式反應：模板的制備,，PCR的模板可以是DNA,，也可以是RNA,。模板的取材主要依據PCR的擴增對象，可以是病原體標本如病毒,、細菌,、菌類等。也可以是病理生理標本如細胞,、血液,、羊水細胞等。法醫(yī)學標本有血斑,、精斑,、毛發(fā)等。標本處理的基本要求是除去雜質,，并部分純化標本中的核酸,。多數樣品需要經過SDS和蛋白酶K處理。難以破碎的細菌,，可用溶菌酶加EDTA處理,。所得到的粗制DNA，經酚,、氯仿抽提純化,，再用乙醇沉淀后用作PCR反應模板。序列間特異性聚合酶鏈反應放大簡單重復序列之間的區(qū)域,，以產生擴增片段長度的獨特指紋,。廣州組織RT-PCR檢測技術應用

聚合酶鏈式反應的特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。廣州組織RT-PCR檢測技術應用

基于聚合酶鏈反應的遺傳(或脫氧核糖核酸)指紋圖譜協議的發(fā)展已在法醫(yī)學中得到較廣應用：遺傳指紋以其辨別力的形式,，可以從世界上所有人群中獨特地區(qū)分任何一個人,。微小的DNA樣本可以從犯罪現場，和比較的從嫌疑人那里,，或者從DNA資料庫早期的證據或罪犯,。這些測試的簡單版本通常用于在刑事調查中快速排除嫌疑人。幾十年前的犯罪證據可以被檢驗,，確認或免責很初被定罪的人,。脫氧核糖核酸指紋中較小的區(qū)別有助于親子鑒定，在親子鑒定中,，一個人和他的近親相匹配,。可以測試未知人類遺骸的DNA,，并與可能的父母,、兄弟姐妹或兒童進行比較。類似的測試可以用來確認被收養(yǎng)(或)孩子的親生父母。新生兒的實際生父也可以被確認(或排除),。廣州組織RT-PCR檢測技術應用