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膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門控性離子通道,,膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)通過記錄煙堿誘發(fā)電流,,可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動(dòng)的全過程,包括受體與其激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力,,離子通道開放,、關(guān)閉的動(dòng)力學(xué)特征及受體的失敏等活動(dòng)。使用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對(duì)煙堿受體激動(dòng)劑量效曲線的影響,,來確定其作用的動(dòng)力學(xué)特征,。然后根據(jù)分析拮抗劑對(duì)受體失敏的影響,,拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點(diǎn),可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點(diǎn),,即判斷拮抗劑是作用在受體的激動(dòng)劑識(shí)別位點(diǎn),離子通道抑或是其它的變構(gòu)位點(diǎn)上,。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,,防止長菌影響實(shí)驗(yàn)。嘉興全自動(dòng)膜片鉗設(shè)計(jì)公司
膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實(shí)驗(yàn)要求,,可以組建不同的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),,但有若干共同的基本部件,包括機(jī)械部分(防震工作臺(tái),、屏蔽罩,、儀器設(shè)備架),、光學(xué)部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器,、單色光系統(tǒng)),、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器,、數(shù)據(jù)采集的設(shè)備,、計(jì)算機(jī)系統(tǒng))和微操縱器在大多數(shù)膜片鉗實(shí)驗(yàn),要求所有實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備均具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性,,以使微電極與細(xì)胞膜之間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)盡可能小,。防震工作臺(tái)放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設(shè)備置于臺(tái)外,。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場(chǎng)對(duì)膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設(shè)備架要靠近工作臺(tái),,便于測(cè)量儀器與光學(xué)儀器配接,。蘇州藥理學(xué)腦定位膜片鉗哪家好膜片鉗使用的注意事項(xiàng):向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多,以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲,。
膜片鉗又稱單通道電流記錄技術(shù),,用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),,又稱巨阻封接,,被孤立的小膜片面積為μm量級(jí),內(nèi)中只有少數(shù)離子通道,。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位,,可測(cè)量單個(gè)離子通道開放產(chǎn)生的pA(10的負(fù)12次方安培)量級(jí)的電流,這種通道開放是一種隨機(jī)過程,。通過觀測(cè)單個(gè)通道開放和關(guān)閉的電流變化,,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率,、開放壽命分布等功能參量,,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系,。還可把吸管吸附的膜片從細(xì)胞膜上分離出來,,以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對(duì)小細(xì)胞的電壓鉗位,、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便,。
膜片鉗的應(yīng)用:對(duì)藥物作用機(jī)制的研究:在通道電流記錄中,可分別于不同時(shí)間,、不同部位(膜內(nèi)或膜外)施加各種濃度的藥物,,研究它們對(duì)通道功能的可能影響,,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動(dòng)物生理功能的分子機(jī)理。這是膜片鉗技術(shù)應(yīng)用較普遍的領(lǐng)域,,既有對(duì)西藥藥物機(jī)制的探討,,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報(bào)道細(xì)胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測(cè)到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導(dǎo)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開放,,從而減少鈣內(nèi)流,,對(duì)缺血細(xì)胞可能有保護(hù)作用。陳龍等報(bào)道采用細(xì)胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對(duì)培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細(xì)胞L-型鈣通道有阻滯作用,。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):實(shí)驗(yàn)迅速,通量高,。一般每天可達(dá)到50個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)左右,。
膜片鉗記錄的幾種形式:內(nèi)面向外膜片(inside-out patch) 高阻封接形成后,在將微管電極輕輕提起,,使其與細(xì)胞分離,,電極端形成密封小泡,在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,,小泡破裂再回到溶液中就得到“內(nèi)面向外”膜片,。此時(shí)膜片兩側(cè)的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制。浴槽電位是地電位,,膜電位等于玻管電位的負(fù)值,。如放大器的電流監(jiān)視器輸出是非反向的,則輸出將與膜電流(Im)的負(fù)值相等,。外面向外膜片(out-side patch) 高阻封接形成后,,繼續(xù)以負(fù)壓抽吸,膜片破裂再將玻管慢慢地從細(xì)胞表面垂直地提起,,斷端游離部分自行融合成脂質(zhì)雙層,,此時(shí)高阻封接仍然存在。而膜外側(cè)面接觸浴槽液,。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):藥液交換迅速,。細(xì)胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進(jìn)行,。杭州細(xì)胞生物學(xué)實(shí)用膜片鉗服務(wù)
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):玻璃微電極需先用甲醇浸泡,,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑,。嘉興全自動(dòng)膜片鉗設(shè)計(jì)公司
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的優(yōu)點(diǎn):與傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄相比,,全細(xì)胞記錄也有很多好處,比如電極尖銳端開口較大,,電阻只2~20MΩ,,易于進(jìn)行電壓/電流鉗制,,噪聲很大程度下降,電極電壓降也變得很小,,補(bǔ)償非常容易,。與單通道記錄相比,單通道記錄無法獲得整個(gè)細(xì)胞的功能變化信息,,而全細(xì)胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細(xì)胞功能(甚至細(xì)胞之間信息傳遞)的改變,,加之易于更換細(xì)胞外液,所以,,全細(xì)胞記錄更適用于對(duì)離子通道的藥理學(xué)研究,,即加各種通道blocker啦,激動(dòng)劑啦之類的,。嘉興全自動(dòng)膜片鉗設(shè)計(jì)公司
上海司鼎生物科技有限公司是一家從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù),,營養(yǎng)健康咨詢服務(wù),商務(wù)咨詢,,計(jì)算機(jī)軟件開發(fā),,化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品,、煙花爆竹,、易制毒化學(xué)品),實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,,儀表儀器的銷售,。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng)】的公司,,是一家集研發(fā),、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司,。司鼎生物作為醫(yī)藥健康的企業(yè)之一,,為客戶提供良好的免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),,在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)。司鼎生物不斷開拓創(chuàng)新,,追求出色,,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),,以服務(wù)為保證,,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù),。司鼎生物始終關(guān)注自身,,在風(fēng)云變化的時(shí)代,對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,,高度的專注與執(zhí)著使司鼎生物在行業(yè)的從容而自信,。