膜片鉗技術(shù)之全細胞式與細胞吸附式的區(qū)別：全細胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細胞吸附式?jīng)]啥兩樣,，無非就是把電極戳在細胞上然后記錄它的電活動。但事實是,，這兩者存在天壤之別,。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上：在cell-attached的記錄中，我們不需要用電極戳破細胞膜,，只需將其懟在細胞膜上即可,；但在whole-cell的記錄中，我們不只要將電極懟進細胞膜內(nèi),，而且還不能懟得過深或過淺,，否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是,，要形成全細胞記錄必須打破細胞膜,，但由于這個操作比較厲害，所以要破膜時請相信玄學(xué),。其次,，第二大區(qū)別在電阻補償上：在cell-attached的記錄中,，由于我們無需打通細胞內(nèi)外膜,，因此細胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當(dāng)中，但是在whole-cell中,，串聯(lián)電阻（Rs）就存在了,，因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細胞的跨膜電位，故我們需要對其進行補償,。這些注意事項包括：電極電容及細胞膜電容補償問題,，漏電流問題，液接電位的校正問題,，空間鉗位問題,，細胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題，電極內(nèi)液的成分問題等。膜片鉗使用操作注意：在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作,。南京細胞生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

膜片鉗在通道研究中的重要作用：利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析,。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門控性離子通道，膜片鉗全細胞記錄技術(shù)通過記錄煙堿誘發(fā)電流,，可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動的全過程,，包括受體與其激動劑和拮抗劑的親和力，離子通道開放,、關(guān)閉的動力學(xué)特征及受體的失敏等活動,。使用膜片鉗全細胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對煙堿受體激動劑量效曲線的影響，來確定其作用的動力學(xué)特征,。然后根據(jù)分析拮抗劑對受體失敏的影響,，拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點,，可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點,，即判斷拮抗劑是作用在受體的激動劑識別位點，離子通道抑或是其它的變構(gòu)位點上,。湖州細胞生物學(xué)離子通道方案膜片鉗使用的注意事項：換液時應(yīng)時刻觀察浴槽,，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。

膜片鉗實驗難度大,、技術(shù)要求高,，要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,，經(jīng)過處理和分析,，得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論,，就顯得不那么容易,，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音,，避免電極前端的污染,，提高封接成功率，具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,，為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi),、外液，如何選擇阻斷劑,、激動劑,，如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問題，還需在科研實踐中不斷地探索和解決,。

膜片鉗技術(shù)—打開細胞電生理研究之門：膜片鉗技術(shù)（patchclamptechniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進行記錄的微電極技術(shù),。膜片鉗技術(shù)的原理：用一個尖銳端直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細胞膜表面,，通過負壓吸引使電極尖銳端與細胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時電極尖銳端下的細胞膜小區(qū)域（膜片,patch）與其周圍在電學(xué)上分隔,，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制,Clamp）電位,，對此膜片上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測及記錄。膜片鉗的應(yīng)用：在心血管藥理研究中的應(yīng)用,。

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：①膜片鉗技術(shù)在通道中的研究,；②與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道研究；③對離子通道生理與病理作用機制的研究,；④對單細胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究,；⑤對藥物作用機制的研究；⑥在心血管藥理方面的研究,；⑦創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究,；⑧在神經(jīng)科學(xué)中的研究。現(xiàn)如今,，膜片鉗技術(shù)已經(jīng)大為普及,，并普遍活躍在離子通道相關(guān)的研究當(dāng)中。也許未來有1天,，膜片鉗技術(shù)會過時,，但兩百年來的探索歷程，數(shù)代學(xué)者們的心血,，以及它在科學(xué)研究中的功績會一直被銘記,。膜片鉗使用的注意事項：打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。蕪湖醫(yī)學(xué)膜片鉗原理及步驟

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,。南京細胞生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

膜片鉗實驗中電極制備之分兩次拉制,，首先次拉長7～10mm，直徑小于200μm,，在此基礎(chǔ)上進行第二次拉制,，較終使尖銳端的直徑為1～2μm，兩步拉制的目的主要是使電極前端的錐度變大,，狹窄部長度縮短,，因此可降低電極的串聯(lián)電阻，也可減少全細胞記錄時的電極液透析時間,。由于膜片微電極較忌沾染灰塵和臟物,，更忌觸碰尖銳端附近部位,，所以一般要求在使用前制作,。拋光：將電極固定于顯微鏡工作臺上，在鏡下將尖銳端靠近加熱絲,，當(dāng)通電加熱時,，可見電極尖銳端微微回縮,，此時電極變得光滑，且尖銳端的雜質(zhì)燒去,，得到較干凈的表面,。從而有利于和細胞膜緊密封接，并在封接后更易保持穩(wěn)定,。南京細胞生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

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