多克隆抗體免疫動物:供免疫用的動物主要是哺乳動物和禽類,,常選擇家兔、綿羊,、山羊,、馬、騾和豚鼠及小鼠等,。動物的選擇常根據(jù)抗體的用途和量來決定,,也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如要獲得大量的抗體,,多采用大動物,;如要是獲得直接標(biāo)記診斷的抗體,則直接采用本動物,;如要獲得間接的標(biāo)記診斷用抗體,,則必須用異源動物制備抗體;如果難以獲得的抗原,,且抗體的需要量少,,則可以采用純系小鼠制備;一般實(shí)驗(yàn)室采用的抗體,,多用兔和羊制備,。免疫用的動物建議選擇適齡的健康雄性動物,雌性動物特別是妊娠動物用于制備免疫抗體則非常不合適,,有時甚至不產(chǎn)生抗體,。單克隆抗體是由單一源頭的B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體,具有高度特異性,。杭州多克隆抗體基因
抗體水解片段:在一定條件下,,Ig分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片段。木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是很常用的兩種Ig蛋白水解酶,,并可籍此研究Ig的結(jié)構(gòu)和功能,,分離和純化特定的12多肽片段??贵w的功能與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān),。同一抗體的V區(qū)和C區(qū)的氨基酸組成和順序的不同,決定了其功能上的差異,。不同抗體的V區(qū)和C區(qū)在結(jié)構(gòu)變化上具有一定的規(guī)律,,又使得其在功能上存在共性。V區(qū)和C區(qū)的組成和結(jié)構(gòu),,決定了抗體的生物學(xué)功能,。河南IgE抗體研發(fā)制造抗體(免疫球蛋白不只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,。
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,,靜脈注射劑量大于皮下注射,,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法,。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,,對家兔而言,采用弗氏完全佐劑,,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法,。如需要獲得高效價的抗血清,,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,,可少量多次,。免疫周期短者,應(yīng)大量少次,。 兩次注射的間隔時間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用,。一般間隔時間應(yīng)為 5~7 天,加佐劑者應(yīng)為 2 周左右,。 注射的 Ig 純度高,則一般不易引起過敏反應(yīng),,如注射血清,,即使是少量,在再次免疫時,,極易引起過敏反應(yīng),,所以一定要采取措施。
多克隆抗體主要從動物免疫血清,、恢復(fù)期患者血清或免疫接種人群的血清中獲得,。多克隆抗體的優(yōu)勢是:作用全方面,具有中和抗原,、免疫調(diào)理,、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用(CDC)、ADCC等重要作用,,而且來源普遍,、制備簡單。其缺點(diǎn)是:特異性不高,、易發(fā)生交叉反應(yīng),,不易大量制備,,因而限制了其應(yīng)用的范圍。單克隆抗體解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體,。如果能獲得只針對單一表位的漿細(xì)胞克隆,,并使其在體外擴(kuò)增分泌抗體,就有可能獲得單一表位特異性的抗體,。然而,,漿細(xì)胞在體外的壽命較短,難以培養(yǎng),。為克服這一缺點(diǎn),,Kohler和Milstein將可產(chǎn)生特異性抗體但短壽的B細(xì)胞與不產(chǎn)生抗體但長壽的骨髓瘤細(xì)胞融合,獲得了可以產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,,從而建立了單克隆抗體制備技術(shù),。特定的抗體可以用于診斷某些疾病,如用于檢測乙肝病毒傳染的抗體,。
多克隆抗體可以采用以下各種方法之一進(jìn)行免疫,。皮下多點(diǎn)注射法:①家兔兩側(cè)掌(跖內(nèi)各注射含有完全佐劑抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7~10 天后,,脊柱兩側(cè)多點(diǎn)(頸,、胸、腰椎各兩點(diǎn),、共 6 點(diǎn))皮下注射含不完全佐劑5的抗原,,每點(diǎn) 0.50ml;③7~10 天后,,脊柱兩側(cè)重復(fù)注射一次,;④7~10 天后試血。不合格者重復(fù)步驟③,。多途徑聯(lián)合注射法:①兩側(cè)掌(跖)內(nèi)側(cè)皮下注射含完全佐劑抗原 0.50ml(IgG 量為 5mg/ml) ,;②14 天后,多點(diǎn)皮下注射含有不完全佐劑抗原,;③7 天后,,耳靜脈注射不含佐劑的抗原 2ml;④測定血清抗體效價,,不合格者重復(fù)步驟③,,并適當(dāng)遞增 IgG 量??贵w的親和力決定了其與抗原結(jié)合的強(qiáng)度,,高親和力的抗體能更有效地中和病原體。深圳正??贵w價格
按抗原反應(yīng)的凝集狀態(tài)分為完全抗體IgM和不完全抗體IgG等,??贵w在醫(yī)療實(shí)踐中應(yīng)用甚為普遍。杭州多克隆抗體基因
抗體主要功能:穿過胎盤屏障和黏膜,。在人類,,lgG是單獨(dú)能夠通過胎盤的抗體。胎盤母體一側(cè)的滋養(yǎng)層細(xì)胞可表達(dá)一種特異性的IgG輸送蛋白,,稱為FcRn,。IgG可選擇性地與FcRn結(jié)合,從而轉(zhuǎn)移到滋養(yǎng)層細(xì)胞內(nèi),,并主動進(jìn)入胎兒的血循環(huán)中,。IgG穿過胎盤的作用在于這是一種重要的自然被動免疫機(jī)制,對于新生兒抗傳染具有重要意義,。另外,,sigA可通過呼吸道和消化道的黏膜,在黏膜局部免疫中發(fā)揮重要的免疫防御作用,。人血清中的抗體多種多樣,,B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生的抗體種類在108以上,可與眾多不同抗原發(fā)生特異性結(jié)合,。杭州多克隆抗體基因
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