抗體特性和功能:IgM占血清Ig總量的5%~10%,,血清濃度約為1mg/ml,。單體IgM以膜結(jié)合型表達(dá)于B細(xì)胞表面,,構(gòu)成B細(xì)胞抗原受體,,只表達(dá)mlgM是未成熟B細(xì)胞的標(biāo)志。分泌型IgM為五聚體,,是分子量很大的Ig,,沉降系數(shù)為19S,稱為巨球蛋白(macroglobulin),,一般不能通過血管壁,,主要存在于血液中。五聚體IgM含有10個(gè)Fab段,,具有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力,;含有5個(gè)Fc段,比IgG更易啟動(dòng)補(bǔ)體,。天然血型抗體為IgM,,血型不匹配的輸血,可導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血反應(yīng),。IgM是個(gè)體發(fā)育過程中很早合成和分泌的抗體,,在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產(chǎn)生IgM,故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內(nèi)傳染(如風(fēng)疹病毒或巨細(xì)胞病毒等傳染),。IgM也是初次體液免疫應(yīng)答中很早出現(xiàn)的抗體,,是機(jī)體抗傳染免疫的“先頭”;血清中IgM升高,,提示新近發(fā)生傳染,,可用于傳染的早期診斷??贵w能識(shí)別特定外來物的一個(gè)獨(dú)特特征,,該外來目標(biāo)被稱為抗原。廣東Prestige抗體怎么購買
多克隆抗體免疫動(dòng)物:抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于調(diào)理,,制備抗體的目的都是要求較高效價(jià),。不同的抗原制備的抗體,,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,,包括有試管凝集反應(yīng),、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定,。抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力,??贵w的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng),。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示,。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測(cè)定。廣東Prestige抗體怎么購買抗體按其反應(yīng)形式分為凝集素,、沉降素,、抗毒、溶解素,、調(diào)理素,、中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體等,。
多克隆抗體可以采用以下各種方法之一進(jìn)行免疫,。皮下多點(diǎn)注射法:①家兔兩側(cè)掌(跖內(nèi)各注射含有完全佐劑抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7~10 天后,,脊柱兩側(cè)多點(diǎn)(頸,、胸,、腰椎各兩點(diǎn),、共 6 點(diǎn))皮下注射含不完全佐劑5的抗原,每點(diǎn) 0.50ml,;③7~10 天后,,脊柱兩側(cè)重復(fù)注射一次;④7~10 天后試血,。不合格者重復(fù)步驟③,。多途徑聯(lián)合注射法:①兩側(cè)掌(跖)內(nèi)側(cè)皮下注射含完全佐劑抗原 0.50ml(IgG 量為 5mg/ml) ;②14 天后,,多點(diǎn)皮下注射含有不完全佐劑抗原,;③7 天后,耳靜脈注射不含佐劑的抗原 2ml;④測(cè)定血清抗體效價(jià),,不合格者重復(fù)步驟③,,并適當(dāng)遞增 IgG 量。
多克隆抗體乳化作用:根據(jù)抗原的性質(zhì),、免疫原性和動(dòng)物的免疫反應(yīng)性來決定免疫途徑,、免疫次數(shù)和間隔時(shí)間等。 免疫途徑包括皮下注射,、皮內(nèi)注射,、肌肉注射、靜脈注射,、腹腔注射以及淋巴結(jié)內(nèi)注射等,。抗原量少,,則一般多采用加佐劑,,淋巴結(jié)內(nèi)或淋巴結(jié)周圍、或足掌,、或皮內(nèi),、皮下多點(diǎn)注射,如抗原量多,,則可采用皮下,、肌肉、以至靜脈注射,。 注射間隔時(shí)間 帶佐劑的皮內(nèi),、皮下注射,一般為間隔 2~4 周免疫一次,。不帶佐劑的皮下或肌肉注射,,一般為 1~2 周間隔時(shí)間;肌肉或靜脈免疫的,,可 5 天左右的間隔時(shí)間,。 可以把各種注射途徑聯(lián)合起來應(yīng)用,然后以達(dá)到效價(jià)要求為目的,??贵w通過與細(xì)菌或病毒表面的抗原結(jié)合來阻止它們進(jìn)一步侵襲機(jī)體。
多克隆抗體抗血清凍存:抗血清收獲后,,加 1/萬硫柳汞或 1/萬的疊氮鈉防腐,,或加入等量的中性甘油,分裝小瓶,,置-20℃以下的低溫保存,,數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無明顯變化,。注意避免反復(fù)凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存,。多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:1,、制備抗原。2,、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,。3、動(dòng)物免疫,。4,、試取血進(jìn)行測(cè)試,看看是否成功免疫,。5,、如果成功免疫,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,,采集全部血清,。6、純化出抗體,。7,、鑒定抗體。包括純度以及特異性,。具體操作與制備原理參見中國免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)**定的抗體可以用于診斷某些疾病,,如用于檢測(cè)乙肝病毒傳染的抗體。廣東Prestige抗體怎么購買
抗體工程可以通過改變抗體的結(jié)構(gòu)和特性來提高其療效和穩(wěn)定性,。廣東Prestige抗體怎么購買
多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠,、明礬、弗氏佐劑,、脂質(zhì)體和石蠟油等,。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等,。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份,;石蠟油 5 份;混合,,高壓滅菌后保存,。用時(shí)加熱融化,冷卻至 50℃左右,,加抗原進(jìn)行乳化處理。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA),;弗氏不完全佐劑 10ml,;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理,。初次免疫時(shí),建議用弗氏完全佐劑,,以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng),。再次免疫時(shí),一般不用完全佐劑,,而采用弗氏不完全佐劑,。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí),一般不用弗氏完全佐劑,,以免卡介苗的干擾,。廣東Prestige抗體怎么購買