單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法,。(1)體內(nèi)誘生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理,。1-2周后,,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體,。約1-2周,可見(jiàn)小鼠腹部膨大,。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體,。(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),。在培養(yǎng)過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,,收集培養(yǎng)上清液,,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體,。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限,。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),極大提高了抗體的生產(chǎn)量,。單克隆抗體可以識(shí)別和分離特定的細(xì)胞類(lèi)型,。上海IgE抗體公司排行
抗體(antibody)是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它(免疫球蛋白不只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,,被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌,、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),只被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面,。抗體能識(shí)別特定外來(lái)物的一個(gè)獨(dú)特特征,,該外來(lái)目標(biāo)被稱(chēng)為抗原,。抗體是一類(lèi)能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白,??贵w按其反應(yīng)形式分為凝集素、沉降素,、抗有害素,、溶解素、調(diào)理素,、中和抗體,、補(bǔ)體結(jié)合抗體等,。四川IgA抗體研發(fā)制造單克隆抗體可以用于調(diào)理病毒傳染。
抗體可變區(qū)和恒定區(qū):通過(guò)分析不同Ig重鏈和輕鏈的氨基酸序列發(fā)現(xiàn),,重鏈和輕鏈靠近N端的約110個(gè)氨基酸序列變化很大,,其他部分氨基酸序列相對(duì)恒定。因此,,將Ig輕鏈和重鏈中靠近N端氨基酸序列變化較大的區(qū)域稱(chēng)為可變區(qū)(variable region,,V),分別占重鏈和輕鏈的1/4和1/2,;將靠近C端的氨基酸序列相對(duì)穩(wěn)定的區(qū)域,,稱(chēng)為恒定區(qū)(constant region,C),,分別占重鏈和輕鏈的3/4和1/2,。恒定區(qū) 重鏈和輕鏈的C區(qū)分別稱(chēng)為CH和CL。不同型(κ或λ)Ig的CL長(zhǎng)度基本一致,,但是不同類(lèi)Ig的CH長(zhǎng)度不同,,例如IgG、IgA和IgD包括CH1,、CH2和CH3,,而IgM和IgE則包括CH1、CH2,、CH3和CH4,;
人血清中的抗體多種多樣,B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生的抗體種類(lèi)在108以上,,可與眾多不同抗原發(fā)生特異性結(jié)合,。抗體多樣性的原因主要有兩方面:1.外源性因素環(huán)境中抗原種類(lèi)甚多,,每種大分子抗原又有多種抗原表位,,每種抗原表位均可選擇啟動(dòng)體內(nèi)一個(gè)B細(xì)胞克隆,產(chǎn)生一種特異性抗體,。2.內(nèi)源性因素抗體多樣性的另一個(gè)原因是由基因的結(jié)構(gòu)及功能特征所決定的,。編碼人Ig重鏈及κ、λ型輕鏈的基因分別位于第14,、2,、22號(hào)染色體上。其中編碼Ig重鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V,、D,、J及編碼恒定區(qū)的C基因;編碼Ig輕鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V、J及編碼恒定區(qū)的C基因,。單克隆抗體可以用于檢測(cè)和監(jiān)測(cè)特定分子的表達(dá),。
免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程,。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫部位,,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,,使其活化、增殖,,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞,。細(xì)胞融合采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,,在平皿內(nèi)擠壓研磨,,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,,形成雜交瘤細(xì)胞??贵w通過(guò)結(jié)合病原體的特定部位來(lái)阻止其進(jìn)一步傳染人體細(xì)胞,。河南同種抗體補(bǔ)給公司
多克隆抗體適用于各種實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用,如免疫染色,、免疫印跡,、流式細(xì)胞術(shù)等。上海IgE抗體公司排行
按抗體產(chǎn)生的來(lái)源分為正??贵w(天然抗體),,如血型ABO型中的抗A和抗B的抗體,和免疫抗體如抗微生物的抗體,。按反應(yīng)抗原的來(lái)源分為異種抗體,,異嗜性抗體,同種抗體和自身抗體,。按抗原反應(yīng)的凝集狀態(tài)分為完全抗體IgM和不完全抗體IgG等,。抗體在醫(yī)療實(shí)踐中應(yīng)用甚為普遍,。如用于疾病的預(yù)防,、診斷和調(diào)理方面都有一定的作用。臨床上用丙種球蛋白預(yù)防病毒性肝炎、麻疹,、風(fēng)疹等,,國(guó)際上用抗Rh免疫球蛋白預(yù)防因Rh血型不合引起的溶血癥。診斷上如類(lèi)風(fēng)濕因子用于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,,抗核抗體(ANA),、抗DNA抗體用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡,抗精子抗體用于原發(fā)性不孕癥的診斷等,;調(diào)理上如中毒用抗毒調(diào)理以及免疫缺陷性疾病的調(diào)理等,。上海IgE抗體公司排行