單克隆抗體：解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識(shí)別單一表位特異性的抗體。如果能獲得只針對(duì)單一表位的漿細(xì)胞克隆,，并使其在體外擴(kuò)增分泌抗體,，就有可能獲得單一表位特異性的抗體,。然而，漿細(xì)胞在體外的壽命較短,，難以培養(yǎng),。為克服這一缺點(diǎn)，Kohler和Milstein將可產(chǎn)生特異性抗體但短壽的B細(xì)胞與不產(chǎn)生抗體但長(zhǎng)壽的骨髓瘤細(xì)胞融合,，獲得了可以產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,，從而建立了單克隆抗體制備技術(shù)。通過該技術(shù)融合形成的雜交瘤（hybridoma）,，既具有骨髓瘤細(xì)胞大量擴(kuò)增和永生的特性,，又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特異性抗體的能力。單克隆抗體可以用于研究疾病的發(fā)病機(jī)制,。蘇州正?？贵w生產(chǎn)廠家

抗體水解片段：在一定條件下，Ig分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片段,。木瓜蛋白酶（papain）和胃蛋白酶（pepsin）是很常用的兩種Ig蛋白水解酶,，并可籍此研究Ig的結(jié)構(gòu)和功能，分離和純化特定的12多肽片段,。木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩條重鏈的近N端,，可將Ig裂解為兩個(gè)完全相同的Fab段和一個(gè)Fc段。Fab段即抗原結(jié)合片段（fragment antigenbinding,，F(xiàn)ab）,，由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成,。一個(gè)Fab片段為單價(jià)，可與抗原結(jié)合但不產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng),；Fc段即可結(jié)晶片段（fragment crystallizable,，F(xiàn)c），由Ig的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域組成,。Fc段無抗原結(jié)合活性,，是Ig與效應(yīng)分子或細(xì)胞相互作用的部位。上海新基因PRR11抗體研發(fā)制造多克隆抗體具有較高的多樣性,，可以覆蓋更普遍的抗原特異性,。

抗體可變區(qū)和恒定區(qū)：通過分析不同Ig重鏈和輕鏈的氨基酸序列發(fā)現(xiàn)，重鏈和輕鏈靠近N端的約110個(gè)氨基酸序列變化很大,，其他部分氨基酸序列相對(duì)恒定,。因此，將Ig輕鏈和重鏈中靠近N端氨基酸序列變化較大的區(qū)域稱為可變區(qū)（variable region,，V）,，分別占重鏈和輕鏈的1/4和1/2；將靠近C端的氨基酸序列相對(duì)穩(wěn)定的區(qū)域,，稱為恒定區(qū)（constant region,，C），分別占重鏈和輕鏈的3/4和1/2,。恒定區(qū) 重鏈和輕鏈的C區(qū)分別稱為CH和CL,。不同型（κ或λ）Ig的CL長(zhǎng)度基本一致，但是不同類Ig的CH長(zhǎng)度不同,，例如IgG,、IgA和IgD包括CH1、CH2和CH3,，而IgM和IgE則包括CH1,、CH2、CH3和CH4,；

抗體的結(jié)構(gòu)：Porter等對(duì)血清IgG抗體的研究證明：Ig分子的基本結(jié)構(gòu)是由四肽鏈組成的,。即：由二條相同的分子量較小的肽鏈(輕鏈)和二條相同的分子量較大的肽鏈(重鏈)組成。輕鏈與重鏈?zhǔn)怯啥蜴I連接形成一個(gè)四肽鏈分子稱為Ig分子的單體,；單體是構(gòu)成所有免疫球蛋白分子的基本結(jié)構(gòu),；所有抗體的單體都是四條肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，即：兩條糖基化重鏈(H)和兩條非糖基化輕鏈(L),；每條重鏈和輕鏈分為氨基端(N端)和羧基端(C端),。輕鏈和重鏈1、輕鏈（light chain，L鏈）由214個(gè)氨基酸殘基組成,，通常不含碳水化合物,，分子量為24kD,，有兩個(gè)由鏈內(nèi)二硫鍵組成的環(huán)肽,，L鏈可分為：Kappa（κ）與 lambda（λ）2個(gè)亞型。2,、重鏈（heavy chain,，H鏈）由450-550個(gè)氨基酸殘基組成，分子量55-75kD,，含糖數(shù)量不同,，4-5個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，可分為5類,，μ,、γ、α,、δ,、ε鏈，不同的H鏈與L鏈（κ或λ）組成完整的Ig分子,。分別稱為：IgM,，IgG，IgA,，IgD和IgE,。多克隆抗體的制備過程需要嚴(yán)格的動(dòng)物倫理管理，確保動(dòng)物的福利,。

由雜交瘤單細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的單克隆抗體只能特異性地與抗原分子上的一個(gè)抗原決定簇結(jié)合,，抗體成分均一，抗體的結(jié)構(gòu),、氨基酸順序,、特異性等都是一致的，且在培養(yǎng)過程中只要不發(fā)生變異,，不同時(shí)間內(nèi)分泌的抗體都能保持同樣的結(jié)構(gòu)和功能,。用這種技術(shù)可按需要生產(chǎn)大量很純的單一抗體，這些是用普通血清學(xué)方法所不能達(dá)到的,。單克隆抗體的發(fā)展經(jīng)歷了鼠源性單克隆抗體,、嵌合性單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人源單克隆抗體四個(gè)階段,。特別是全人源單克隆抗體,，其可變區(qū)和恒定區(qū)都是人源的，這類抗體藥物具有高親和力,、高特異性,、幾乎沒有毒副作用等優(yōu)點(diǎn),，克服了動(dòng)物源抗體及嵌合抗體的各種缺點(diǎn)，成為調(diào)理性抗體藥物發(fā)展的必然趨勢(shì),；單克隆抗體可以識(shí)別和分離特定的細(xì)胞類型,。上海新基因PRR11抗體研發(fā)制造

多克隆抗體可以通過交叉反應(yīng)的方式檢測(cè)相關(guān)的抗原。蘇州正?？贵w生產(chǎn)廠家

選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,，未融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中DNA的從頭合成途徑會(huì)被阻止,；未融合的骨髓瘤細(xì)胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA,；這樣未融合小鼠骨髓瘤細(xì)胞的兩個(gè)DNA合成途徑都被阻止,，骨髓瘤細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡。 未融合的B淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡,。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從B淋巴細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，可以通過補(bǔ)救途徑合成DNA,，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性,，因此，雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖,。蘇州正?？贵w生產(chǎn)廠家