單克隆抗體:解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體,。如果能獲得只針對單一表位的漿細胞克隆,,并使其在體外擴增分泌抗體,就有可能獲得單一表位特異性的抗體,。然而,,漿細胞在體外的壽命較短,難以培養(yǎng),。為克服這一缺點,,Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽的骨髓瘤細胞融合,獲得了可以產生單克隆抗體的雜交瘤細胞,,從而建立了單克隆抗體制備技術,。通過該技術融合形成的雜交瘤(hybridoma),既具有骨髓瘤細胞大量擴增和永生的特性,,又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗體的能力,。單克隆抗體的研究有助于解決藥物抗性的問題。杭州Prestige抗體費用
抗體的功能與其結構密切相關,。同一抗體的V區(qū)和C區(qū)的氨基酸組成和順序的不同,,決定了其功能上的差異。不同抗體的V區(qū)和C區(qū)在結構變化上具有一定的規(guī)律,,又使得其在功能上存在共性,。V區(qū)和C區(qū)的組成和結構,決定了抗體的生物學功能,。識別并特異性結合抗原是抗體的主要功能,,執(zhí)行該功能的結構是抗體的V區(qū),其中CDR部位在識別和結合特異性抗原中起決定性作用,??贵w有單體,、二聚體和五聚體,,因此結合抗原表位的數(shù)目也不相同??贵w結合抗原表位的個數(shù)稱為抗原結合價,。杭州Prestige抗體費用單克隆抗體可以用于研究疾病的發(fā)病機制。
單克隆抗體技術在臨床應用中為疾病的診斷,、調理提供了新手段,,作為調理用藥物,單克隆抗體主要應用于tumour,、自身免疫疾病,、部位移植排斥及病毒傳染等領域。單克隆抗體也可用于tumour的導向調理,將針對某一tumour抗原的單克隆抗體與化療或放療藥物連接,,利用單克隆抗體的專一性識別結合特點,,將藥物攜帶至靶細胞并直接將其殺傷。由于單克隆抗體具有特異性強,、純度高,、均一性好等優(yōu)點,極大促進了單克隆抗體檢測試劑盒的發(fā)展,,在病原微生物,、免疫細胞及細胞因子的檢測診斷中廣泛應用。若將放射性標記物與單克隆抗體連接,,注入患者體內后可進行放射免疫顯像,,協(xié)助tumour的診斷。在親和色譜中單克隆抗體是重要的配體,,若將單克隆抗體固定到一個惰性的固相基質上,,則可用于特異性抗原分子的高度純化。
單克隆抗體的大量制備主要采用動物體內誘生法和體外培養(yǎng)法,。(1)體內誘生法取BALB/c小鼠,,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周后,,腹腔內接種雜交瘤細胞,。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖,并產生和分泌單克隆抗體,。約1-2周,,可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,,即可獲得大量單克隆抗體,。(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細胞置于培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,,雜交瘤細胞產生并分泌單克隆抗體,,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細胞及其碎片,,即可獲得所需要的單克隆抗體,。但這種方法產生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術和裝置不斷出現(xiàn),,極大提高了抗體的生產量,。多克隆抗體的制備過程可以在實驗室中完成,并且通常具有較高成功率,。
19世紀后期,,Von Behring及其同事Kitasato研究發(fā)現(xiàn),,用白喉或破傷風免疫動物后可產生具有中和有害素作用的物質,稱之為antitoxin,,隨后引入“抗體”一詞來泛指抗有害素類物質,。抗體(antibody,,Ab)是B細胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細胞所產生的糖蛋白,,主要存在于血清等體液中,是介導體液免疫的重要效應分子,,能與相應抗原特異性結合,,發(fā)揮免疫功能。1937年,,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白,、α1、α2,、β及γ球蛋白等組分,,并發(fā)現(xiàn)抗體主要存在于γ區(qū),因此抗體又被稱為γ球蛋白,。單克隆抗體可用于針對惡性癥細胞的免疫調理,。杭州Prestige抗體費用
多克隆抗體可以通過親和層析或凝集素親和純化方法進行純化,以獲得較高純度的抗體,。杭州Prestige抗體費用
抗體結構域:輕鏈有VL和CL兩個結構域,;IgG、IgA和IgD的重鏈有VH,、CH1,、CH2和CH3四個結構域;IgM和IgE的重鏈有五個結構域,,即多一個CH4結構域,。每個結構域由約110個氨基酸組成,氨基酸序列具有相似性,,其二級結構是由幾條多肽鏈折疊形成的兩個反向平行的β片層(anti-parallel β sheet)構成的,,兩個β片層中心的兩個半胱氨酸殘基由一個鏈內二硫鍵垂直連接,形成一個“β桶狀(βbarrel)”或“β-三明治 (β sandwich)”結構,,這種折式稱為免疫球蛋白折疊(immunoglobulin folding),。許多膜型和分泌型的蛋白質分子也含有這類獨特折疊的二級結構,,因此,,這類分子被統(tǒng)稱為免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuperfamily,IgSF),。杭州Prestige抗體費用