取上述200μL細(xì)胞液加入小室,，下室（培養(yǎng)板）加入900L含有10% FBS的培養(yǎng)基。不同規(guī)格的小室和培養(yǎng)板所加的體積不同,，具體參考Millicell?產(chǎn)品說明書,。37°C孵育24至72小時(shí),，依據(jù)**細(xì)胞類型而定,。孵育結(jié)束,，小心取出細(xì)胞小室,，吸掉小室上層培養(yǎng)液,，PBS清洗一遍,，70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,，0.5%結(jié)晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色20min，然后進(jìn)行第8步或者第9步,。PBS清洗兩次以去除多余的染料,，立即用棉簽擦去濾膜上層的細(xì)胞，自然靜置風(fēng)干,。顯微鏡下觀察濾膜下層的細(xì)胞,，隨機(jī)選取不同的視野計(jì)數(shù)并算平均值。結(jié)晶紫溶解濾膜下層細(xì)胞,，然后用33%醋酸脫色,，將結(jié)晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標(biāo)儀上570nm讀取OD值,。這種方法可以避免視野下細(xì)胞穿透不均勻帶來的誤差,。益啟***的批發(fā)價(jià)是多少呢？松江區(qū)干細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)銷售

每隔2天用電阻儀測(cè)量細(xì)胞跨膜電阻值,，直到達(dá)到平臺(tái),，提示細(xì)胞已經(jīng)形成致密單層；或者通過檢測(cè)熒光染料熒光黃的通過率,，以判斷細(xì)胞剛好完全匯合,。電阻儀測(cè)量因不傷害細(xì)胞，可以繼續(xù)培養(yǎng)而比熒光黃法更為普遍地被采用,。細(xì)胞單層匯合后,，用DPBS清洗一次細(xì)胞，加入含有不同濃度藥物（一般10-200μM）的緩沖液,。如果要測(cè)藥物從上至下的運(yùn)輸效果,，則上層小室中加藥物，下層培養(yǎng)板孔里只加緩沖液,；反之則相反,。將培養(yǎng)板在37℃條件下培養(yǎng)（60rpm震蕩或者不震蕩）1-2h，到達(dá)時(shí)間之后,，分別從細(xì)胞小室和培養(yǎng)孔里取出一定 體積緩沖液（一般50μL ）轉(zhuǎn)移至新的轉(zhuǎn)運(yùn)分析板進(jìn)行LC/MC分析,。對(duì)于放射性標(biāo)記藥物，分別取出20μL緩沖液加入100μL閃爍液,，通過多孔閃爍讀板儀讀值,。普陀區(qū)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)商家益啟生物公司帶您了解干細(xì)胞培養(yǎng)詳情。

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