在臨床應(yīng)用中,，免疫組化還可以進(jìn)一步分類不同qi官與組織交界處cancer,。由于重疊的特征，在一些組織qi官交界處的cancer,，只憑組織學(xué)基礎(chǔ)對(duì)cancer進(jìn)行分類很困難,。如胃腸道梭形細(xì)胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤，是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST),，還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細(xì)胞cancer,，兩者較難區(qū)別，且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同,，但用免疫組化檢測(cè)角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細(xì)胞cancer,，而角蛋白陽(yáng)性則為胚胎cancer。英瀚斯生物免疫組化,，高效高質(zhì)量出結(jié)果,。江蘇小鼠免疫組化檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)失敗常見問(wèn)題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致,，可能的原因有：1.染色操作不當(dāng),，致使染色失敗,；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性,；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性,；4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)?。建議逐一排查，找到原因后重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽(yáng)性,，這是為什么,？答：與上一個(gè)問(wèn)題類似，出現(xiàn)的原因也是試驗(yàn)操作存在問(wèn)題,，可能的原因有：1.切片在染色過(guò)程中抗體過(guò)濃,，或者干片了；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),；3.抗體溫育的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深，這是為什么,？答：以下幾方面會(huì)導(dǎo)致切片的背景過(guò)深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血,，造成抗體的非特異性反應(yīng)；2.內(nèi)源性過(guò)氧化酶沒有完全阻斷,，顯色過(guò)程中過(guò)氧化酶與酶底物反應(yīng),，造成背景；3.底物呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底,。 新疆小鼠免疫組化實(shí)驗(yàn)英瀚斯生物,，組織包埋,、切片,、染色、免疫組化拍照,、報(bào)告分析,，一站式搞定！

免疫組化臨床應(yīng)用中,，可以對(duì)傳染性疾病診斷,。應(yīng)用抗病毒、細(xì)菌,、zhen菌和寄生蟲抗原的特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色,，可以檢測(cè)和診斷許多傳染性疾病病原微生物，如乙型肝炎病毒(HBV),、巨細(xì)胞病毒(CMV),、人乳T狀瘤病毒(HPV)、皰疹病毒(HSV),、丙型肝炎病毒(HVC),、細(xì)小病毒B19、人禽流行性感冒病毒(AIV),、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS)等等,，由于免疫組化在傳染性疾病診斷中具有及時(shí)性、低風(fēng)險(xiǎn)性,、高敏感性,、特異性,、有效性等特點(diǎn)，可以用于(1)用于人類新病原微生物的識(shí)別;(2)提供快速的形態(tài)學(xué)診斷,，使嚴(yán)重傳染性疾病得以早期醫(yī)療;(3)在無(wú)法取得新鮮組織或尚無(wú)培養(yǎng)方法的情況下,，提供診斷并對(duì)發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究和認(rèn)識(shí)。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),，一站式醫(yī)學(xué)科研平臺(tái),。

細(xì)胞爬片免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干,。

2、PBS洗3次,，每次5min,。3、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液,，室溫下孵育10min,，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

4,、PBS洗3次,，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

5,、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過(guò)夜,。

6、PBS洗3次,，每次5min,。

英瀚斯生物，細(xì)胞,、動(dòng)物,、臨床樣本免疫組化檢測(cè)都可完成！

7,、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min,。

8,、PBS洗3次，每次5min,。

9,、去除PBS液,，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色,。

10,、顯色完全后，蒸餾水或自來(lái)水沖洗,，蘇木素復(fù)染,，1%鹽酸酒精分化（1s），自來(lái)水沖洗,，氨水返藍(lán),，流水沖洗。

11,、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度,，脫水干燥，二甲苯透明,，中性樹膠封固,。 有沒有推薦的免疫組化外包公司？

免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片,？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,，這是***我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片,，可能會(huì)破壞組織的抗原性,，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片,；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片,。

（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),，可能會(huì)使抗原彌散,；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮,。當(dāng)你買一抗時(shí),，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍,，就不能做石蠟,，如寫著兩者都可，那就都能做,。

（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),，且容易存放在室溫,，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中,，尤其是用來(lái)做原位雜交的的切片,，為了防止RNA降解，保存一貫很重要,。由于石蠟切片可以切到4微米左右,，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功,，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好,。

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免疫組化結(jié)果怎么看？江蘇小鼠免疫組化檢測(cè)

免疫組化有哪幾種分類 ,？

 1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類,，如熒光染料、放射性同位素,、酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶）,、鐵蛋白、膠體金等,，可分為免疫熒光法,、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等,。

 2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步,、三步或多步法）。與直接法相比,，間接法的靈敏度提高了許多,。

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3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶（***）法；親和連接,，如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法,；聚合物鏈接,，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 江蘇小鼠免疫組化檢測(cè)

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