病理實驗外包,，南京英瀚斯可開展冰凍切片免疫熒光染色1.  冰凍切片室溫晾干15 min,，可用含10%正常山羊血清的PBS室溫封閉切片1小時（此步可不洗）。2.  滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液（抗體的量視組織大小而定,，原則是可以均勻覆蓋組織面,，且保證整個過程中不會使組織干涸）,。3.  將切片放在加了PBS的免疫組化濕盒，室溫孵育2小時或4℃過夜,。4.  第二天先將濕盒放到37℃回溫1 h,，然后吸取片上的一抗進行回收，將切片插入到小染缸PBS沖洗,。5.  滴加用PBS稀釋好的二抗（避光）置于分子雜交箱中37℃孵育1小時,。回收二抗,，切片置于染缸內(nèi),，PBS洗5 min×3次。6.  滴加DAPI工作液染核,，室溫10~20 min（工作濃度0.1%染色15 min）,。7.  回收DAPI,，滴加5-10 μl 抗熒光衰減封片劑或中性樹膠，用處理干凈的蓋玻片封片,，即可到熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀察拍照,。8.  做好的片放在切片盒內(nèi)，置于4℃冰箱,，可保存一周左右,。揭開病理實驗外包神秘面紗，南京英瀚斯生物,。遼寧生物病理實驗外包公司

病理實驗外包,，病理染色HE染色常見問題：Q1：HE染色比較常見的紅藍失調(diào)答：（1）偏藍色：蘇木素染色過深，分化不夠,；伊紅試劑過期,；伊紅染色時間太短，分化過度,。（2）偏紅色：蘇木素染色過淺,，分化過度；組織固定不佳,，細胞核不著色,；脫蠟不徹底，蘇木素染不上,；蘇木素氧化成熟不夠,；伊紅染色過深，分化不足,。Q2：HE染色后出現(xiàn)的大白色斑塊或斑點答：脫蠟前烤片溫度偏低，時間過短,，蠟未完全融化,；切片在脫蠟溶劑中停留時間過短；脫蠟溶劑使用太久,，得更新,。遼寧比較好的病理實驗外包推薦病理實驗外包檢測，經(jīng)驗豐富,，操作熟練,。

病理實驗外包，病理染色切片常見問題及解決方法：1.切片粘在切片刀不易取下●原因：切片時有靜電作用,，產(chǎn)生靜電吸引,，在冬季或氣候干燥時常出現(xiàn)這種情況?！窠鉀Q方法：可用加濕器,。以增加空氣中的水分,，而減少靜電作用。2.切片厚薄不均●原因：①切片微動部分失靈,，齒輪跳格,。②蠟塊太大，過硬,，轉(zhuǎn)動時刀刃受震動,。●解決方法：①修理切片機失靈的部分,，調(diào)整螺旋,。加機油潤滑零件，必要時需請專業(yè)技術(shù)人員調(diào)整切片機,。②如蠟塊過大,，以后取材時注意取材的大小。蠟塊組織過硬,，可返回水中浸泡,，再重新脫水和包埋。

病理實驗外包,，病理染色常見染色介紹PAS染色：PAS染色法（PeriodicAcid-Schiffstain）在組織學上,，主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,，再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色,。PAS染色利用高碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基，再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色,，顯示糖原定位,。染色步驟1.石蠟切片脫蠟至水（細胞涂片，冰凍切片直接水洗）,；2.蒸餾水洗,；3.過碘酸酒清夜10min；4.自來水沖洗10min,；5.Schiff氏液10min,；6.流水沖洗5min；7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化）,；8.流水沖洗5min,；9.常規(guī)脫水、透明,、封固,。結(jié)果PAS陽性為紅色，細胞核藍色,。電鏡檢測,，病理實驗外包選南京英瀚斯,。

病理實驗外包，病理染色常見染色介紹普魯士藍染色：普魯士藍染色（Prussianbluereaction）又稱為含鐵血黃素染色,，即經(jīng)過亞鐵**鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色,，常見于吞噬細胞內(nèi)會間質(zhì)內(nèi)，主要顯示三價鐵鹽,。Perls普魯士藍是非常經(jīng)典的組織化學反應(yīng),，是顯示組織內(nèi)三價鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法,，其染色原理為：亞鐵**鉀溶液使三價鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來,，三價鐵與亞鐵**鉀反應(yīng)，生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵**物普魯士藍,，所以該反應(yīng)被稱為普魯士藍反應(yīng),。三價鐵的亞鐵**物是一種很穩(wěn)定的化合物，在反應(yīng)后可用紅色染色劑進行復(fù)染,，如核固紅,、伊紅、中性紅等,。Perlsstain常用于顯示局部組織內(nèi)各種出血***變,，常見于吞噬細胞內(nèi)。在判斷含鐵血黃素沉積時,，用Perls反應(yīng)可以得到證實,，該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色素。該染色液穩(wěn)定性好,、可以長期保存,、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣,、可以進行復(fù)染,。南京英瀚斯，專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺,。病理實驗外包檢測,醫(yī)學實驗,動物模型構(gòu)建。云南比較好的病理實驗外包

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病理實驗外包,，病理染色HE染色常見問題：Q5：細胞核呈棕紅色改變答：蘇木素染液過度氧化,；或蘇木素染色后反藍不足導致。應(yīng)該立即更換蘇木素染色液,?；蛟诹鲃幼詠硭?一般自來水PH7.5-7.8),，或在稀釋的氨水溶液，或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡,，這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果,。Q6：伊紅染色較淡答：伊紅的PH改變了(PH可能已大于5)；或反藍液體未漂洗干凈,，殘留后影響胞漿嗜酸性染色,；或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久。對策：檢查伊紅染色液PH,，可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0,。根據(jù)以上提示，調(diào)整實驗步驟,。遼寧生物病理實驗外包公司