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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-07-03

HE染色實(shí)驗(yàn)步驟:(1)樣品制備:對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,,胰酶消化,,調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),,培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后,,取出細(xì)胞爬片,用PBS洗滌3次,。(2)樣品固定:95%乙醇固定20min,,PBS洗滌2次,每次1min,。(3)染核:蘇木素染液染色2-3min,,自來(lái)水洗滌。(4)分色:鏡下觀察,,若細(xì)胞核染色過(guò)深,,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來(lái)水洗滌,。(5)染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,,自來(lái)水洗滌。(6)吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后,,中性樹(shù)膠封片,。若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng),,蘇木素染色12-15min,,伊紅5min即可什么是HE染色,HE染色實(shí)驗(yàn)的目的,。新疆質(zhì)量好的HE染色公司

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HE染色原理:易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱(chēng)為嗜堿性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia),;而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱(chēng)為中性(neutrophilia),。構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)很多,,它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中,,染色液的酸堿度為pH6左右,,細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色,,這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜堿性,。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白,、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜酸型,。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,,pH值升高時(shí),則原來(lái)被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性,;pH值降低時(shí),,原來(lái)被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝浴K哉f(shuō)染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng),。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,,帶負(fù)電荷,呈酸性,,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色,。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色,。云南結(jié)果客觀的HE染色分析HE染色結(jié)果如果使用計(jì)算機(jī)分析軟件分析,?

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HE染色等常規(guī)染色,組化或是熒光優(yōu)先推薦做石蠟切片,。原因:石蠟切片對(duì)組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,,并且對(duì)抗原基本無(wú)影響。脂質(zhì)染色(油紅O染**odipy染色,,尼羅紅染色)必須做冰凍切片,,不能做石蠟切片。以下染色必須要新鮮或冷凍組織冰凍切片:ROS染**-半乳糖甘酶染色,,ATP染色,,膽固醇染色。如果標(biāo)本已經(jīng)放在-80°冰箱冷凍了之后又想要做石蠟切片,,將標(biāo)本取出來(lái)千萬(wàn)不要解凍直接放于固定液內(nèi)固定(在固定液內(nèi)邊解凍邊固定),。組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好順序:新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>組織-80°冷凍后投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定冰凍切片>組織-80°冷凍后直接冰凍切片。

HE染色伊紅著色淡分析及應(yīng)對(duì)原因:(1)伊紅染液的pH值可能大于5,;(2)藍(lán)化液殘留過(guò)多,;(3)切片太薄,;(4)切片經(jīng)伊紅染色后在乙醇脫水時(shí)間過(guò)長(zhǎng),。對(duì)策:檢查伊紅染液的pH值,如果必要的話(huà),,用乙酸將其調(diào)節(jié)在4~5之間,,從而使伊紅染色彩艷麗。確保每次藍(lán)化步驟完成后,,使用的弱堿性溶液被充分洗去,,玻片上沒(méi)有殘留的弱堿性溶液,。檢查切片的厚度。脫水時(shí)不要讓切片在低濃度乙醇停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng),,因?yàn)楹嗟牡蜐舛纫掖紩?huì)將伊紅的顏色分化掉,。比較基礎(chǔ)的病理染色HE染色。

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HE染色樣本組織固定與切片:首先將組織樣本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋,。在模具中加入液態(tài)石蠟,,將待包埋的組織樣本放入石蠟中,確保組織位置規(guī)整,。補(bǔ)充少許液態(tài)的石蠟后,,進(jìn)行降溫冷凍,使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果,,然后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片,,厚度在4-8um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展,。組織樣本脫蠟:將待測(cè)組織樣本切片放于二甲苯中,,充分浸泡10min,浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10min,,目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解,,這樣可以在進(jìn)行染液染色的時(shí)候,染液可以充分進(jìn)入組織種,,同時(shí),,二甲苯還可以起到透明的作用,使切片更容易觀察,。關(guān)于HE染色,,常用的結(jié)果分析原理。海南HE染色哪家好

HE染色注意事項(xiàng)以及常規(guī)的流程解析,。新疆質(zhì)量好的HE染色公司

HE染色:在組織病理學(xué)中,,蘇木素-伊紅染色是一種日常使用比較普遍的常規(guī)染色方法。常規(guī)蘇木素染色的對(duì)比染色是用伊紅,,也有采用焰紅,,因?yàn)檠婕t比伊紅色澤更鮮明,還有采用橘黃G,,比布里希猩紅,,波爾多紅等作為對(duì)比染色。伊紅是比較常用的胞質(zhì)染料,,本身溶于醇而不溶于水,,為磚紅色粉末狀或醬紅色結(jié)晶,。配方:伊紅Y(水溶)0.5-1g,,蒸餾水99ml,。如果取用伊紅Y(醇溶性)應(yīng)當(dāng)溶于99ml 75%或95%的乙醇中。如果在伊紅液中加入0.5ml冰醋酸,,可以加速其染色過(guò)程,,使得胞質(zhì)的色澤更加艷麗。結(jié)果是細(xì)胞核呈藍(lán)色,,胞質(zhì),、肌肉、結(jié)締組織,、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色,。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色。新疆質(zhì)量好的HE染色公司