免疫組化實驗所用的抗體

免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備,。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,，從動物血中所獲得的免疫血清,，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法,，免疫酶標法，親和組織化學法,，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法,。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,，其中生物素—抗生物素染色法常用,。 大鼠、小鼠組織免疫組化,，找英瀚斯生物,。貴州組織免疫組化要多少錢

免疫組化如何才能充分脫蠟？

 （1）蠟不溶于水,，如果脫蠟不干凈,，少許蠟存留于切片上，將會引起染色不均勻,、陽性物時隱時現(xiàn),、真假難辨,、背景染色增加等。為了解決上述的問題,，切片在染色前必須徹底脫蠟,，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強,，脫蠟時間較短,； 

（2）脫蠟的時間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同,。如果在夏天,，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮,，則脫蠟時間不需很多,，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,，室溫較低,，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時間需要延長,，10-20分鐘或更長,。

（3）當天切的切片，燒烤2小時后進行染色,，切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程,，如果預(yù)先切好烤好的切片，在染色前,，還必須對切片進行加溫10-20分鐘,，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快,，效果魁偉更好,。總之,，操作時應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié),，不同的室溫，不同的試劑來決定,，脫蠟的時間,，原則上是要徹底、干凈,、完全地脫去切片上的蠟,。

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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間,、稀釋抗體來控制,。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,，建議試用單克隆抗體看看,。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織）,，需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色,； 

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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果,； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等,； 

（6）適當增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗,、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要,； 

（7）防止標本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強非特異性著色,。

免疫組化的顯色系統(tǒng)

免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見信號的關(guān)鍵步驟,。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀,，適用于光學顯微鏡觀察,。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀，適用于光學顯微鏡觀察,，但不適合長期保存,。此外,，還有熒光顯色系統(tǒng),，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察,。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實驗?zāi)康暮蜋z測設(shè)備,。 關(guān)于免疫組化，你想知道的都在這里,！

目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹

1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學技術(shù),。由于免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡便,，所以在臨床病理診斷,、檢驗中應(yīng)用較廣。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,，先將已知抗體標上熒光素,，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察,。當抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析,。

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2）免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后,，于60年代發(fā)展起來的技術(shù),。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,，然后加入酶的底物,，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡,，對細胞表面和細胞內(nèi)的各種抗原成分進行定位研究,。免疫酶標技術(shù)是目前**常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點是：定位準確,，對比度好,，染色標本可長期保存，適合于光,、電鏡研究等,。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標記方法,，且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新,，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便,。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法,、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等,。

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免疫組化的實驗步驟

免疫組化的實驗步驟通常包括組織固定,、切片、抗原修復(fù),、封閉,、一抗孵育、二抗孵育,、顯色和復(fù)染等,。首先，組織樣本需要經(jīng)過固定（如福爾馬林固定）以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu),。然后,，將固定后的組織包埋在石蠟中并切成薄片?？乖迯?fù)是為了暴露被固定過程掩蓋的抗原表位,，常用的方法有熱修復(fù)和酶消化。封閉步驟是為了減少非特異性結(jié)合,，通常使用血清或BSA,。一抗孵育是關(guān)鍵步驟，一抗與目標蛋白特異性結(jié)合,。二抗孵育則是通過二抗與一抗結(jié)合,，并連接顯色系統(tǒng)。,，通過顯色和復(fù)染使目標蛋白可視化,。 貴州組織免疫組化要多少錢