免疫組化如何才能充分脫蠟？

 （1）蠟不溶于水,，如果脫蠟不干凈,，少許蠟存留于切片上，將會引起染色不均勻,、陽性物時隱時現(xiàn),、真假難辨、背景染色增加等,。為了解決上述的問題,，切片在染色前必須徹底脫蠟,，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強,，脫蠟時間較短,； 

（2）脫蠟的時間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同,。如果在夏天,，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮,，則脫蠟時間不需很多,，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,，室溫較低,，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時間需要延長,，10-20分鐘或更長。

（3）當天切的切片,，燒烤2小時后進行染色,，切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程，如果預(yù)先切好烤好的切片,，在染色前,，還必須對切片進行加溫10-20分鐘，然后再行脫蠟,，這樣脫蠟速度加快,，效果魁偉更好?？傊?，操作時應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié)，不同的室溫,，不同的試劑來決定,，脫蠟的時間，原則上是要徹底,、干凈,、完全地脫去切片上的蠟。

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1,、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,，脫蠟至水,，用PBS沖洗三次，每次5min,。

2,、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù)，中火至沸后斷電,，間隔10min低火至沸,。

3、自然冷卻后PBS洗3次,，每次5min,。4、切片放入3%過氧化氫溶液,，室溫下孵育10min,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

5,、PBS洗3次,，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

6,、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過夜,。

7、PBS洗3次,，每次5min,。

8、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,，4℃孵育50min。

9,、PBS洗3次,，每次5min。

10,、去除PBS液,，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色,。

11,、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染,，1%鹽酸酒精分化（1s）,，自來水沖洗，氨水返藍,，流水沖洗,。

12、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度,，脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹膠封固,。 江蘇組織免疫組化推薦免疫組化的樣本保存要求是什么,？

免疫組化結(jié)果要如何分析？

 （1）陽性著色細胞計數(shù)法,。在40*光鏡下,，隨機選擇不重疊的10個視野，機器或人工計數(shù)陽性著色細胞,，每組3~6張不同動物組織切片,，然后進行組間比較即可。

（2）灰密度分析法,?？梢酝ㄟ^在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進行灰密度分析,，然后進行統(tǒng)計分析即可。

（3）評分法,。用光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色,、淡黃色、淺褐色,、深褐色）,、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%、26~50%,、51~75%,、76~100%），**終可以分數(shù)相加,，再進行比較,。對于以上這幾種方法，各有利弊,，請細心選擇,。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片,。

英瀚斯生物,，專業(yè)病理染色團隊,，不止做檢測，還有專業(yè)病理分析,。

醫(yī)療和預(yù)后有關(guān)的免疫組化,。與醫(yī)療及預(yù)后有關(guān)的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc,、P53蛋白等,，卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化,、術(shù)后殘存cancer灶呈正相關(guān);乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預(yù)后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高,，PTEN基因表達減弱，提示cancer預(yù)后不良,。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫(yī)療與預(yù)后,，如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67,、PCNA,、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價，表達指數(shù)越高,，表明其增殖指數(shù)越活躍,，惡性度增高，預(yù)后不良,，其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發(fā)現(xiàn)Ki-67,、EGFR陽性者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,，并與ji素受體的表達呈負相關(guān),。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等,，應(yīng)用更為范圍廣的的是子宮內(nèi)膜cancer及乳腺cancer,，如對乳腺cancer中ER、PR的檢測,，有助于決定臨床醫(yī)療中是否需要加入內(nèi)分泌ji素阻斷醫(yī)療,，并能判斷預(yù)后，ER及PR陽性表達,、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素醫(yī)療反應(yīng)良好,，而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大,。免疫組化樣本如何處理,？

免疫組化的DAB顯色時間如何把握？

1,、DAB顯色時間不是固定的,，主要由顯微鏡下控制顯色時間,，到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗；

2,、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色,，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間,；

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3,、此外,，若很短時間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,，需要延長封閉時間,；

4、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色,，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）,；另一方面就是封閉時間過長。 英瀚斯生物,，組織包埋,、切片、染色,、免疫組化拍照,、報告分析，一站式搞定,！安徽動物組織免疫組化外包

免疫組化技術(shù)的原理,、分類和優(yōu)點！湖南切片免疫組化怎么樣

免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對其染色結(jié)果的判斷,，進而影響病理診斷，所以制作一張良好的免疫組化切片至關(guān)重要,，它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調(diào),，密切配合和共同努力，病理醫(yī)生選擇抗體,，設(shè)置對照,，判讀結(jié)果，指導技術(shù);而技術(shù)人員進行實驗操作,，保證染色質(zhì)量,。在免疫組化切片的制作過程存在多個環(huán)節(jié)，每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測結(jié)果,，如抗原保存,，蛋白酶消化,，增強技術(shù)及對抗體的管理、使用和試劑的濃度等等,，因此制作一張高質(zhì)量的免疫組織化學切片是多方面相互配合的結(jié)果,。湖南切片免疫組化怎么樣