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湖南細胞免疫組化實驗

來源: 發(fā)布時間:2025-04-12

做免疫組化時如何選擇一抗?

1,、單克隆和多克隆抗體的選擇,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,,就像導(dǎo)彈精確地命中目標一樣,。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,,在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體,。在抗原抗體反應(yīng)中,,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,,檢測抗原靈敏度相對就低,;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,,靈敏度高,,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。

2,、應(yīng)用范圍的選擇,。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫組化,、免疫熒光,、免疫沉淀等;甚至標明石蠟切片或冰凍切片,。

3,、種屬反應(yīng)性的選擇(speciesreactivity),。這一點很重要,表明這種抗體可能存在種屬差別,,且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內(nèi)的抗原,。

4、種屬來源,,一般兔來源的多是多克隆抗體,;而小鼠來源的多是單克隆抗體,但也有另外,。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗,。

5、生產(chǎn)廠家的選擇,。


常見的免疫組化方法有哪些,?湖南細胞免疫組化實驗

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免疫組化實驗流程介紹:

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細步驟:

1、SP三步法

1)石蠟切片,,常規(guī)脫蠟至水,。

2)0.3%或3%H2O2去離子水(無色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性,。

3)蒸餾水沖洗,,PBS浸泡5分鐘

4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓,、酶修復(fù)方法,。自然冷卻,再用3分鐘×3次.

5)血清封閉:室溫15-30分鐘,,盡可能與二抗來源一致,。傾去,勿洗,。

6)滴加適當比例稀釋的一抗,,37℃孵育2~3小時或4℃過夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,,3分鐘×5次。

7)滴加生物素標記的二抗,,室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

8)PBS沖洗,3分鐘×5次,。

9)滴加SP(鏈霉親和素-過氧化物酶),,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10)PBS沖洗,,3分鐘×5次,。

11)顯色劑顯色(DAB等),。

12)自來水充分沖洗。

13)可進行復(fù)染,,脫水,,透明。

14)選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?云南組織免疫組化檢測英瀚斯生物做免疫組化怎么樣,?

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什么是免疫組化,?免疫組化的原理是什么?

1,、定義:用標記的特異性抗體對組織切片或細胞標本中某些化學(xué)成分的分布和含量進行組織和細胞原位定性,、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù),。

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2,、原理:根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合,,再利用一抗與標記生物素,、熒光素等的二抗進行反應(yīng),前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,,通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學(xué)成分,,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,,從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量,。

免疫組化的局限性:在病理診斷中,,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),,免疫組化在病理診斷和醫(yī)療中已有了很重要的位置,對于cancer診斷,、鑒別診斷,、分類及諸多方面產(chǎn)生了重大的影響,。但是免疫組化技術(shù)還存在著缺陷和不足,,作為病理醫(yī)生和病理技術(shù)人員不僅要充分認識到缺陷和不足,而且要努力避免由于缺陷和不足給診斷帶來的誤區(qū),,這就要求病理醫(yī)生和病理技術(shù)人員在工作中不斷學(xué)習(xí)與研究,,在實際操作中總結(jié)經(jīng)驗教訓(xùn),分析失敗原因,努力實現(xiàn)操作規(guī)范化,、標準化,,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理診斷及鑒別診斷、臨床醫(yī)療中的指導(dǎo)作用,。免疫組化方法步驟是什么,?

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確定cancer分期,免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床可以進行處理哦,,英瀚斯生物為您處理,。cancer分期是判斷預(yù)后的一個指標,與是否浸潤,、有無淋巴管或血管侵襲密切相關(guān),,而通過免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲,。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分,,用于區(qū)分原位*和浸潤*,一旦上皮性*突破基膜為浸潤,,未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細胞的標記物第八因子相關(guān)蛋白,、D2-40等則可清楚顯示cancer對血管或淋巴管的浸潤。因此對許多cancer的良惡性鑒別及有無血管或淋巴管浸潤,,免疫組化結(jié)果作為主要的鑒別依據(jù),。免疫組化檢測多少錢?細胞免疫組化注意事項

免疫組化流程是什么樣的,?湖南細胞免疫組化實驗

免疫組化中免疫膠體金技術(shù),,英瀚斯生物小編為您說明介紹。免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物,。膠體金是指金的水溶膠,,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響,。因此,,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,,就能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性,、定位,甚至定量研究,。由于膠體金有不同大小的顆粒,,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究,。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察,。湖南細胞免疫組化實驗