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腦脊液提取試劑盒原理

來源: 發(fā)布時間:2023-02-27

外泌體作為細胞間信使較早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中,,是直徑為30~150nm,密度為1.10~1.18g/ml的細胞外囊泡,,攜帶豐富的遺傳信息,,參與細胞信號轉導、細胞遷移,、瘤子新生血管生長和瘤子微環(huán)境形成等過程,。由于現(xiàn)存的分離技術是基于外泌體的大小、結構和膜蛋白的親和捕獲,,比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質復合體區(qū)分開,,分離出的外泌體蛋白濃度通常會被高估,并且不同亞型外泌體之間可能會有不同蛋白質特征,,所以對分離的外泌體進行鑒定對于后期研究至關重要,。外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理,。腦脊液提取試劑盒原理

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外泌體的提取分離方法:1,、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心、高速離心交替進行,,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑,;此外,,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量,。2,、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,耗時,。臨床診斷級別外泌體多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。

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外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,,其大小均一,,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質干細胞,、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質和脂質等,,可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能,、參與細胞生物學活動等,。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生,。

尺寸排阻色譜法(SEC)根據(jù)大小來分離樣本,。該技術應用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱,該聚合物珠包含多個孔和通道,分子根據(jù)其直徑穿過,。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間,,而大分子則較早地從柱子上洗脫下來。SEC可精確分離大分子和小分子,。與離心分離方法相比,,SEC分離的外泌體不受剪切力的影響,剪切力可能會改變囊泡的結構,。此方法分離到的外泌體純度較高,,在電鏡下大小均一,但是獲取量少,,所需設備特殊,。此外,,SEC方法與超濾相結合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析,。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應用已經(jīng)涉及醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域。

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外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子,、生長因子)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質,在體內(nèi)參與細胞通訊,、細胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關,。由于外泌體的特殊結構和功能,,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,,另一方面也可以作為診療手段,,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,,應選用血漿還是血清,?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,,凝血因子,,以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白,,具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。外泌體產(chǎn)生相關的重要分子:Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。成都血漿外泌體

外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。腦脊液提取試劑盒原理

外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成,。它也由各種類型的脂質和蛋白質組成,,這些脂質和蛋白質衍生自形成外泌體的親代細胞。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫ExoCarta的資料,,目前已知約有8000種蛋白質和194種脂質與外泌體相關,。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌,包括滑膜液,,母乳,,血液,尿液,,唾液,,羊水和血液中的血清,這表明它們在細胞間通訊和觸發(fā)生理反應中起著重要的作用,。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質,。簡而言之,它們是天然膜囊泡,,將蛋白質,,RNA,DNA和脂質從一個細胞攜帶到另一個細胞,,從而調節(jié)受體細胞的生物功能,。腦脊液提取試劑盒原理

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