外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,，其大小均一,，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,，可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動等,。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿ΑＭ饷隗w的膜同細(xì)胞一樣,，是磷脂雙分子層,。干細(xì)胞提取試劑盒公司

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力,，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道,，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成,。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價值,。疾病的進(jìn)展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定,。干細(xì)胞外泌體lncRNA芯片外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放,。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子,、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值,，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),，另一方面也可以作為診療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。外泌體研究,，應(yīng)選用血漿還是血清？答：血清是血液凝固之后收集的液體,，所以其中少了纖維蛋白原,，凝血因子，以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,，具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。

常規(guī)生物學(xué)實驗中,，實時定量PCR技術(shù)（RT-PCR）普遍用于microRNA的檢測實踐中，但外泌體樣品中的microRNA豐度極低,，普通RT-PCR技術(shù)的靈敏度已經(jīng)不能夠滿足,。第三代微滴式數(shù)字PCR——ddPCR技術(shù)，成為外泌體microRNA檢測的選擇技術(shù),。微滴式數(shù)字PCR（DropletdigitalPCR）,，又成為“油包水PCR”，在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前對樣品進(jìn)行微滴化處理,，即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個納升級的微滴,，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子,。經(jīng)PCR擴(kuò)增后,，逐個對每個微滴進(jìn)行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1,，沒有熒光信號的微滴判讀為0,，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測量流體體積,，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量,。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間,，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集,，到收集完成后自動停止,。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進(jìn)行定量,，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,，對所測樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。干細(xì)胞提取試劑盒公司

電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。干細(xì)胞提取試劑盒公司

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用,，表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時,，甚至可以進(jìn)行定量,。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進(jìn)行預(yù)處理,。同樣,，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。干細(xì)胞提取試劑盒公司

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