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來源: 發(fā)布時間:2023-03-14

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn),,主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù)、大小和形狀將其分離出來,。首先4℃低速離心(300-500g,,10min)去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片,隨后以較高離心速度(2000xg,,10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,,然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡,結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體。通過懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白,。超速離心法具有操作簡單,、不易被分離試劑污染、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點(diǎn),。但是此方法需要昂貴的超高速離心機(jī),,每次處理的樣本量較小,費(fèi)時,,電鏡鑒定時還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,,且上清中仍能檢測到大型囊泡,純度不高,,另外高速離心會損傷外泌體影響下游實(shí)驗(yàn),。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞,。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。腦脊液提取試劑盒價錢

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外泌體生物學(xué)功能:1,、在心血管系統(tǒng)中,,據(jù)報道,源自人胚胎干細(xì)胞(ESC)的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷,;2,、在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,;3,、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動,,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理,;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑,。然而,,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始,。膜受體的識別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),,它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中,。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。江西外泌體攝取外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,,是具有生物活性的脂雙層囊泡,。

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外泌體研究背景:胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,,主要由微囊泡、凋亡小體,、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,,密度1.10~1.18g/ml,,可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,,存在于血液,、唾液、尿液等多種體液中,。越來越多的研究證實(shí),,外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì),、脂質(zhì)等特定物質(zhì),,發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析。

外泌體研究背景:胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,,主要由微囊泡,、凋亡小體、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml,,可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,存在于血液,、唾液,、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實(shí),,外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),,發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、肉瘤細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析。外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,,能綁定特異性的肽鏈,。

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Exosome,中文名外泌體,,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。2015年,隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,,越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療,。外泌體作為一個新型的研究熱點(diǎn),由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,,已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,,在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式:超速離心法,。外泌體具有相似布朗運(yùn)動的蛋白質(zhì)聚集體,,因此無法排除其他物質(zhì)干擾。湖北鼻腔灌洗液外泌體

外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì),。腦脊液提取試劑盒價錢

PEG沉淀法分離外泌體:通常通過將無水聚合物,,如聚乙二醇(PEG),與樣品混合來沉淀外泌體,。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子,,增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體,然后通過離心分離外泌體,。這種分離的方法快速,,簡便,可用于各種起始體積(從100μL到幾毫升)適合于各種研究和臨床設(shè)定,。然而,,這種方法缺乏選擇性,,PEG聚合物不只會導(dǎo)致外泌體小泡沉淀,還會引起其他細(xì)胞外囊泡,、細(xì)胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀,。因此,在使用這種方法之前,,必須進(jìn)行樣品預(yù)處理,,例如過濾或超速離心,以減少較終的外泌體制劑的污染,。腦脊液提取試劑盒價錢

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