外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,，它具有自我更新，多向分化,、分泌細胞因子和細胞外囊泡體,、免疫調(diào)節(jié)、來源普遍等特點,，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能，包括修復(fù)與再生組織,、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機體免疫,，但外泌體相對于間充質(zhì)干細胞又有許多優(yōu)勢。首先,，間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存，易于管理和控制,，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量,。其次，它們沒有活細胞,，不會像間充質(zhì)干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重,；另外，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細胞的調(diào)控問題,，間充質(zhì)干細胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細胞的趨勢,。隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域。廣州外泌體鑒定

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞,、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用,，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的,。完整的外泌體的進入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域。廣州外泌體鑒定選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。

密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,，目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,，這種方法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內(nèi)體）分離到密度梯度溶液中的不同層中,。樣品被放置在梯度的頂部,，當(dāng)施加離心力時，樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度,，該梯度以從上到下的密度增加,。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集,，密度梯度超速離心對從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效,。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,、費時且會造成外泌體損失,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本,，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運動,，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾,。外泌體作為小分子的藥物傳遞載體,。

外泌體作為細胞間信使較早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中，是直徑為30~150nm,，密度為1.10~1.18g/ml的細胞外囊泡,，攜帶豐富的遺傳信息，參與細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、細胞遷移、瘤子新生血管生長和瘤子微環(huán)境形成等過程,。由于現(xiàn)存的分離技術(shù)是基于外泌體的大小,、結(jié)構(gòu)和膜蛋白的親和捕獲，比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質(zhì)復(fù)合體區(qū)分開,，分離出的外泌體蛋白濃度通常會被高估,，并且不同亞型外泌體之間可能會有不同蛋白質(zhì)特征，所以對分離的外泌體進行鑒定對于后期研究至關(guān)重要,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響。體液外泌體circRNA測序

提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）,、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的,。廣州外泌體鑒定

細胞外小泡通過充當(dāng)脂肪組織、肝臟,、骨骼肌和免疫細胞之間的細胞間通訊方式,，在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用,，外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機理的主要組成部分,。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性，即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用,。后者可通過與主要胰島素信號分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號通路）相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生,。與對照組相比，糖尿病患者的血漿EV含量更高,，并且與對照組相比,，糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高。然而，確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解,，特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量,，因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究。廣州外泌體鑒定

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