AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),，根據(jù)稱重精確測量流體體積，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量,。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,，當達到設定的提取體積后,，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集，到收集完成后自動停止,。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量,。在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制,。干細胞提取試劑盒原理

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物,，也可以進行機理研究？首先,，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期,。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組,，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物,。進一步,，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應的關(guān)鍵通路,。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中,，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進一步活躍NF-κB通路,。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物,，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路,，促進CLL進展的特殊機理,。細胞外囊泡研究進展采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,。

近年來,，外泌體的捕獲技術(shù)越來越多，微流體系也被用于外泌體提取,，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測,。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內(nèi)表面,，并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設備復雜,，所需的樣本量取決于流動通道的長度,。另外，樣品量的注入速率比較低,，因此,，對于大樣品量，將需要較長的處理時間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能,。目前，研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,，離心技術(shù)仍然是常用方法,，其他方法，例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,，也顯示出獨特的優(yōu)勢，但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,，研究人員應針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性,，變性后,，通過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中,?？贵w特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中,。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測,。常用的標記蛋白為CD63、CD81,、TSG101和ALIX等,。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質(zhì)量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小,，后者直徑為100nm-1μm,。外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6,、PLD2,、RAB家族。

細胞外小泡通過充當脂肪組織,、肝臟,、骨骼肌和免疫細胞之間的細胞間通訊方式，在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用,。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用,，外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機理的主要組成部分。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性,，即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號通路）相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生,。與對照組相比,，糖尿病患者的血漿EV含量更高，并且與對照組相比,，糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高,。然而，確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解,，特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量,，因此就胰島素反應而言它們的生物學功能尚未研究。外泌體可由間充質(zhì)干細胞,、淋巴細胞和瘤子細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。外泌體nta檢測步驟

外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)病）方面的潛力,。干細胞提取試劑盒原理

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用,，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體，當使用標準液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標準曲線時,，甚至可以進行定量,。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理,。同樣,，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類,，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡,。干細胞提取試劑盒原理

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