外泌體的臨床應(yīng)用:間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類型,它具有自我更新,,多向分化,、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié),、來源普遍等特點(diǎn),,在臨床診療中取得了良好的成果。間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能,,包括修復(fù)與再生組織,、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫,但外泌體相對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢(shì),。首先,,間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體更穩(wěn)定,,更好保存,易于管理和控制,,可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量,。其次,它們沒有活細(xì)胞,,不會(huì)像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會(huì)過多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重,;另外,它有可能避免某些針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問題,,間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢(shì),。干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸,、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。血清外泌體PKH26
近年來,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,,微流體系也被用于外泌體提取,,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,,且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè),。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,,所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外,,樣品量的注入速率比較低,,因此,對(duì)于大樣品量,,將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前,,研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,,離心技術(shù)仍然是常用方法,其他方法,,例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),,但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,,研究人員應(yīng)針對(duì)不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。廣州體液外泌體超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法,。
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA):將其中一種針對(duì)外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,,表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,并使用另一種抗體檢測(cè)固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體,當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),,甚至可以進(jìn)行定量,。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,。同樣,,流場(chǎng)-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測(cè)器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,,通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,,其大小均一,直徑為40-100nm,,密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能,、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。
外泌體的提取,、純化和鑒定:每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)(電子顯微鏡技術(shù))、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì),,且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家
磁珠免疫法分離的外泌體,,生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及,。血清外泌體PKH26
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),,在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為診療手段,,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。外泌體研究,應(yīng)選用血漿還是血清,?答:血清是血液凝固之后收集的液體,,所以其中少了纖維蛋白原,凝血因子,,以及多了比較多凝血產(chǎn)物,。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體,,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。血清外泌體PKH26
上海宇玫博生物科技有限公司目前已成為一家集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn),、銷售相結(jié)合的生產(chǎn)型企業(yè),。公司成立于2015-10-16,自成立以來一直秉承自我研發(fā)與技術(shù)引進(jìn)相結(jié)合的科技發(fā)展戰(zhàn)略,。公司主要產(chǎn)品有外泌體提取試劑盒,,外泌體,外泌體檢測(cè),,外泌體提取等,,公司工程技術(shù)人員、行政管理人員,、產(chǎn)品制造及售后服務(wù)人員均有多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn),。并與上下游企業(yè)保持密切的合作關(guān)系。Umibio集中了一批經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)及管理專業(yè)人才,,能為客戶提供良好的售前,、售中及售后服務(wù),并能根據(jù)用戶需求,,定制產(chǎn)品和配套整體解決方案,。上海宇玫博生物科技有限公司通過多年的深耕細(xì)作,企業(yè)已通過醫(yī)藥健康質(zhì)量體系認(rèn)證,,確保公司各類產(chǎn)品以高技術(shù),、高性能、高精密度服務(wù)于廣大客戶,。歡迎各界朋友蒞臨參觀,、 指導(dǎo)和業(yè)務(wù)洽談。