外泌體的臨床應用：間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,，它具有自我更新,，多向分化,、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節(jié),、來源普遍等特點,，在臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,，包括修復與再生組織,、阻止炎癥反應及調節(jié)機體免疫,，但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優(yōu)勢,。首先，間充質干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存,，易于管理和控制，可以人為改變其內容物的種類和數(shù)量,。其次,，它們沒有活細胞,，不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重；另外,，它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題,，間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢。干細胞外泌體攝取流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸,、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。血清外泌體PKH26

近年來，外泌體的捕獲技術越來越多,，微流體系也被用于外泌體提取,，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,，且可及時獲取外泌體用于疾病的相關檢測,。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設備復雜,，所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,，樣品量的注入速率比較低,，因此，對于大樣品量,，將需要較長的處理時間,。外泌體在包括瘤子在內的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前,，研究人員已經開發(fā)了多種方法來分離外泌體,，離心技術仍然是常用方法，其他方法,，例如過濾,、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨特的優(yōu)勢,，但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,，研究人員應針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。廣州體液外泌體超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法,。

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,，由于抗體-抗原相互作用,，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體，當使用標準液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標準曲線時,，甚至可以進行定量,。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理,。同樣,，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,，通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,，其大小均一，直徑為40-100nm,，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。外泌體內主要含有核酸,、蛋白質和脂質等，可作為疾病診斷標記物,、調控靶細胞功能,、參與細胞生物學活動等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學（電子顯微鏡技術）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移,、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質雙層膜結構,，能比較好的保護其包被的物質，且能靶向特定細胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。外泌體天然存在于體液中，包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。乳液外泌體提取試劑盒生產廠家

磁珠免疫法分離的外泌體,，生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。血清外泌體PKH26

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質（如細胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質,，在體內參與細胞通訊、細胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,，使得它具有潛在的應用價值,，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標，另一方面也可以作為診療手段,，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。外泌體研究，應選用血漿還是血清,？答：血清是血液凝固之后收集的液體,，所以其中少了纖維蛋白原，凝血因子,，以及多了比較多凝血產物,。纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白，具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。血清外泌體PKH26

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