細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞,、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用,，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的,。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏,、吞噬作用、小凹和大胞飲作用,。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。細胞外泌體優(yōu)勢

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學特性,，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力,，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力,。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價值,。疾病的進展和對診療的反應也可以通過外泌體的多組分分析來確定。胞外囊泡外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力,。

外泌體與免疫反應,、病毒致病性、妊娠,、心血管疾病,、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和病癥進展相關(guān)。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質(zhì),、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應,。這種外泌體介導的反應可以促進或阻止疾病。外泌體在調(diào)節(jié)復雜的細胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途,，主要包括神經(jīng)退行性疾病和病癥,。外泌體可被設計用于遞送不同的診療有效載荷，包括短干擾,、反義寡核苷酸,、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑，并具有將其遞送到預期目標的能力,。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1,、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進行下一步的實驗。2,、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高,。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3,、色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備,，應用不普遍,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細胞,。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標志物CD63,、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達,，從而實現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒,，從而導致數(shù)據(jù)不準確,。因此，為了通過流式細胞儀觀察,，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術(shù)之前,，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析,，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。在研究和評估外泌體的副作用和功效時,，必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風險。北京外泌體透射電鏡檢測

疾病的進展和對診療的反應可以通過外泌體的多組分分析來確定,。細胞外泌體優(yōu)勢

外泌體發(fā)現(xiàn)于1986年,，是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體，可由機體內(nèi)多種細胞如免疫細胞,、干細胞,、心血管細胞、網(wǎng)織紅細胞,、血小板,、神經(jīng)細胞和肉瘤細胞等主動分泌產(chǎn)生，普遍分布于外周血,、尿液,、唾液、乳汁,、腹水,、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細胞因子,、生長因子）以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細胞通訊,、細胞遷移,、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,，使得它具有潛在的應用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,，另一方面也可以作為診療手段,，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。細胞外泌體優(yōu)勢

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