細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,,包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用,。外泌體的內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。研究所外泌體提取試劑盒服務(wù)
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,,通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,,其大小均一,直徑為40-100nm,,密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能,、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。吉林腦脊液外泌體外泌體分離之后,,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。
外泌體的相關(guān)成分:1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層,。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,,能綁定特異性的肽鏈,。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN、GTPases。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide、SM,、PC,,限制膜流動(dòng),參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6,、外泌體中含有核酸,,包括miRNA、DNA,、lncRNA,、mRNA;同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中,。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進(jìn)行主動(dòng)包埋,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。
外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞,。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關(guān),。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細(xì)胞分泌,,包括滑膜液,,母乳,,血液,尿液,,唾液,,羊水和血液中的血清,這表明它們在細(xì)胞間通訊和觸發(fā)生理反應(yīng)中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì),。簡而言之,,它們是天然膜囊泡,將蛋白質(zhì),,RNA,,DNA和脂質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞攜帶到另一個(gè)細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物功能,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),,現(xiàn)今,,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體,。成都外泌體miRNA芯片
外泌體的數(shù)量:人體中大約有1014個(gè),,近乎于平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。研究所外泌體提取試劑盒服務(wù)
外泌體的相關(guān)成分:1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,,能綁定特異性的肽鏈,。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN、GTPases,。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide,、SM,、PC,限制膜流動(dòng),,參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸,包括miRNA,、DNA,、lncRNA、mRNA,;同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral,、ARF6、PLD2,、RAB家族,。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),,進(jìn)行主動(dòng)包埋,。外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層,。研究所外泌體提取試劑盒服務(wù)
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