外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1,、2、4,、5,、6,、7、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）,、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源),、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素,。外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA,。江蘇外泌體PKH26

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本,，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動,，實現(xiàn)顆粒可視化,。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體,，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。北京外泌體lncRNA測序外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成,。

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞,、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用,。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進行標記,，可用流式細胞儀檢測到陽性表達,，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液,，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導(dǎo)致一次觀察到多個顆粒,，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準確。因此,，為了通過流式細胞儀觀察,，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細胞術(shù)之前,，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體的膜同細胞一樣,，是磷脂雙分子層。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,，主要由微囊泡,、凋亡小體、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml,，可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液,、唾液,、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實,，外泌體可以通過細胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),，發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中,、肉瘤細胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析。外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。臨床診斷級別外泌體

外泌體是其中一類小囊泡,，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml,。江蘇外泌體PKH26

外泌體提取在短時間（一周之內(nèi)）使用,，可以放在4度保存，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存,。也可以將外泌體進行分裝,，分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法：外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物，多角度進行鑒定,。l,、透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。2、納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA,，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。江蘇外泌體PKH26

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