透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會發(fā)生散射,，捕獲并檢測散射的電子,，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過樣品,，并使用熒光屏進(jìn)行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時(shí)對樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,，不適合進(jìn)行大量快速的測量,；而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,，從而影響觀察的效果,，無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,，生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及,。超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。羊奶提取試劑盒銷售

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。浙江外泌體Dil外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。

外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles,，EVs）,，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等，同時(shí)也存在于組織樣本中,，如腦組織,、肌肉組織、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片,，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化，經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒,，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻,，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,，包括除雜,、濾膜過濾、超離等,。結(jié)尾用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測量流體體積,，可精確的測量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測量總重量,。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間,，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后,，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集，到收集完成后自動停止,。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,，而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,，對所測樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量,。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。

DLS使用由于粒子的布朗運(yùn)動而產(chǎn)生的波動散射光的強(qiáng)度來估計(jì)外泌體顆粒的大小分布及其zeta電位,。DLS樣品制備方便,，只需要簡單的過濾，測量速度較快,，需要的樣品體積較少,。但由于動態(tài)光散射技術(shù)是基于光強(qiáng)測量，散射光的強(qiáng)度與粒徑的六次方成正比,，使得當(dāng)測量多種粒徑的混合懸浮液時(shí)，通常會偏向于檢測較大粒徑產(chǎn)生的散射光,，比較難檢測到較小顆粒,。所以DLS不適合對粒徑分布較寬的外泌體樣本的測量，只適合尺寸較為均一的外泌體樣本,，并且無法測量樣品中外泌體的濃度,。外泌體的提取的方式：過濾離心。植物外泌體Dil

外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體,。羊奶提取試劑盒銷售

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測到陽性表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測時(shí)需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此,，為了通過流式細(xì)胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細(xì)胞術(shù)之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號,，不只可以對外泌體進(jìn)行高通量分析,，還可以基于抗原表達(dá)對外泌體進(jìn)行定量或分類。羊奶提取試劑盒銷售

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