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外泌體ppt

來源: 發(fā)布時間:2023-05-07

肉瘤細胞可以通過產(chǎn)生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應(yīng)答并促進瘤子細胞的活動而大量產(chǎn)生外泌體,這些外泌體富含促病的細胞成分,,例如PD-L1,、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白,,參與病癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥性,。值得注意的是,,肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1。ESCRT(運輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體)參與將生物分子包裝到外泌體中,,nSMase2(中性鞘磷脂酶2)和Rab蛋白調(diào)節(jié)外泌體分泌,。已確定ESCRT、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌,。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運至其他PD-L1表達低或沒有PD-L1的細胞,,并可能與PD-1結(jié)合。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。外泌體ppt

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液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術(shù),,能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉(zhuǎn)移過程中釋放到血液中的循環(huán)中流細胞(circulatingtumorcell,,CTC)、循環(huán)中流DNA(circulatingtumorDNA,,ctDNA)和中流外泌體等中流組分,。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成,基于其內(nèi)容物成分多樣和穩(wěn)定等優(yōu)勢,,正成為中流標志物相關(guān)研究的熱點,。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障、天然的歸巢特性,、雙分子層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和高效的生物相容性等特征,。因此,中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體,,尤其是工程化外泌體更表現(xiàn)出很好的中流靶向干預(yù)和增強藥物zhiliao的效果,。外泌體蛋白提取近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。

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外泌體的提取分離的方法:1,、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心、高速離心交替進行,,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑,;此外,,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。2,、密度梯度離心:在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時。

外泌體的提取,、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能比較好的保護其包被的物質(zhì),,且能靶向特定細胞或組織,,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法,。

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目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒,,是根據(jù)外泌體表面由類似于細胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性,用試劑捆綁水分子,,從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體,。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少,、對設(shè)備要求低,,但與差速離心方法類似,其分離得到的沉淀包含其他細胞分泌的囊泡,,且血清中含有大量血清蛋白分子,,成分復(fù)雜,,很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達這一特性,,使用耦合到磁珠的抗抗體,,采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少,,不適用于大規(guī)模提取制備,,且免疫磁珠價格昂貴,不利于提取技術(shù)的普及,。外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。外泌體蛋白提取

干細胞外泌體通過改變細胞外基質(zhì),,改變受體細胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組,,調(diào)節(jié)細胞凋亡,生長,,增殖和分化途徑,。外泌體ppt

細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體ppt

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