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海洋生物外泌體NTA

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-05-06

外泌體的miRNA或蛋白質(zhì)等遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān),在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點(diǎn)或分子標(biāo)志物,。對(duì)外泌體的研究,,將有利于闡述肝臟及其疾病的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制,為尋求臨床可用的biomarkers和開發(fā)新的治理方法提供支持,。外泌體可以通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和miRNAs進(jìn)行細(xì)胞間交流,從而作用于周圍的細(xì)胞并改變肝臟的微環(huán)境,。細(xì)胞內(nèi)多泡體(MVBs)與細(xì)胞膜融合,,釋放內(nèi)部的外泌體到細(xì)胞外,被其他細(xì)胞攝取,,通過細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞作用釋放攜帶的內(nèi)含物,,在受體細(xì)胞中調(diào)控生理活動(dòng)。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長(zhǎng),、細(xì)胞遷移,、抗病毒等生理過程。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合。海洋生物外泌體NTA

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目前,,在各種健康與疾病模型中都發(fā)現(xiàn),,外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色。外泌體還越來越多地被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子,,具有重要的臨床診斷和治理意義,。除此之外,它們還有潛力被用于臨床,,作為基因和藥物遞送的載體,。健康人和多種疾病的患者會(huì)將含有不同RNA和蛋白質(zhì)成分的外泌體釋放到體液循環(huán)中,因其特殊性,,外泌體可以作為生物標(biāo)志物來對(duì)疾病進(jìn)行檢測(cè),。例如,從血液或尿液中分離的外泌體可以用作病癥,、心臟病的診斷和預(yù)后的指標(biāo),。湖南CD9外泌體慢病毒包裝外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。

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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA):將其中一種針對(duì)外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,,由于抗體-抗原相互作用,表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,,并使用另一種抗體檢測(cè)固定的外泌體。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體,,當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),甚至可以進(jìn)行定量,。但是,,此方法需要通過超速離心或超濾對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣,,流場(chǎng)-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測(cè)器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度,。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,,耗時(shí),量少,。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍,。不同類別的外泌體囊泡有三個(gè)征:表面具涂層的膜泡,、內(nèi)含纖維的膜泡、電子致密囊泡,。

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外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì):(1)與正常細(xì)胞相比,,病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體,。(2)由于特殊的生成方式,,外泌體的組成不同于來源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源,、結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸方式,,有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進(jìn)入血液,、尿液等體液,,囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶,、核酸酶等干擾,,有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性,通過對(duì)此類體液進(jìn)行分析可以實(shí)現(xiàn)疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)檢測(cè),。外泌體可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送,。細(xì)胞上清外泌體iTRAQ

外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出,特別是血液中釋放的病細(xì)胞來源的外泌體,。海洋生物外泌體NTA

外泌體的提取分離的方法:1,、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,,但過程比較費(fèi)時(shí),,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑,;此外,,重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量,。2,、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,耗時(shí),。海洋生物外泌體NTA

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