外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類(lèi)型,，它具有自我更新，多向分化,、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體,、免疫調(diào)節(jié)、來(lái)源普遍等特點(diǎn),，在臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能，包括修復(fù)與再生組織,、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫,，但外泌體相對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢(shì)。首先,，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存，易于管理和控制,，可以人為改變其內(nèi)容物的種類(lèi)和數(shù)量。其次,，它們沒(méi)有活細(xì)胞,，不會(huì)像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會(huì)過(guò)多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重；另外，它有可能避免某些針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問(wèn)題,，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢(shì),。干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷,，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合,。黑龍江外泌體NTA

尋找肝臟疾病的新型分子標(biāo)志物一直是研究熱點(diǎn),，也是難點(diǎn)。不同肝臟疾病中,，細(xì)胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異,。這些不同生理狀態(tài)下外泌體所攜帶的特異性蛋白分子、miRNA等,，是潛在的分子診斷和預(yù)后標(biāo)志物,。肝細(xì)胞患者中，血清外泌體miR-21,、-18a,、-221、-222和miR-224明顯上升,，miR-101,、-106b、-122和miR-195明顯下降,。而HCC患者肝移植復(fù)發(fā)后,，血清外泌體miR-718水平明顯下降。除外泌體外,，微泡也有可能作為新型標(biāo)志物,，研究發(fā)現(xiàn)HCV患病者中CD4+和CD8+T細(xì)胞來(lái)源的微泡含量上升；而肝臟干細(xì)胞分泌的微泡中多種miRNAs上調(diào),。細(xì)菌外泌體提取試劑盒步驟多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。

瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)不斷地將外泌體釋放到周?chē)h(huán)境中去，同時(shí),，外泌體能在4℃保存96h,，或是在-70℃下保存更長(zhǎng)時(shí)間，可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷,。隨著技術(shù)的進(jìn)步,，已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領(lǐng)域，外泌體中存在黑色素瘤標(biāo)志物包括MIA,、S100B和酪氨酸酶相關(guān)蛋白,，且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者,，通過(guò)檢測(cè)MIA和S100B表達(dá)水平對(duì)黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說(shuō),，液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來(lái)源上的延伸,，進(jìn)一步豐富了檢測(cè)手段，而隨著外泌體的不斷揭秘,，相信其會(huì)在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用,。

血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80°C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿,、牛奶,、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過(guò)程造成的囊泡破壞,。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運(yùn)輸過(guò)程中有時(shí)很難維持這種低溫條件,。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過(guò)程中使用海藻糖作為保護(hù)劑,海藻糖可以提供生物保護(hù)作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過(guò)程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過(guò)程中細(xì)胞外囊泡的損失等,。結(jié)果表明,，PS親和法可以檢測(cè)到許多目前為止都無(wú)法檢測(cè)的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過(guò)將無(wú)水聚合物,，如聚乙二醇（PEG）,，與樣品混合來(lái)沉淀外泌體。PEG聚合物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合水分子,，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體,，然后通過(guò)離心分離外泌體。這種分離的方法快速,，簡(jiǎn)便,，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設(shè)定。然而,，這種方法缺乏選擇性,，PEG聚合物不只會(huì)導(dǎo)致外泌體小泡沉淀，還會(huì)引起其他細(xì)胞外囊泡,、細(xì)胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀,。因此，在使用這種方法之前,，必須進(jìn)行樣品預(yù)處理,，例如過(guò)濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染,。干細(xì)胞外泌體可以有效活化提高細(xì)胞能量加速細(xì)胞排毒,、淡化色斑。海洋生物外泌體示蹤

外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記,。黑龍江外泌體NTA

外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷,，成熟于多囊泡胞內(nèi)體,，終于膜融合,。細(xì)胞通過(guò)內(nèi)吞作用產(chǎn)生小囊泡,，小囊泡融合形成早期胞內(nèi)體（earlyendosome），在多個(gè)蛋白的協(xié)同調(diào)控下,，早期胞內(nèi)體出芽形成含有多個(gè)腔內(nèi)小囊泡的多泡體（multivesicularbodies,，MVB），這個(gè)過(guò)程中這些腔內(nèi)小囊泡（intraluminalvesicles,，ILVs）會(huì)裝載各種核酸和蛋白質(zhì)等分子，泡內(nèi)體較后在GTPase家族中RAB酶的調(diào)節(jié)下與細(xì)胞膜融合,。隨后,，這些小囊泡會(huì)被釋放到細(xì)胞外,，稱(chēng)為外泌體。外泌體是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞細(xì)胞膜融合主動(dòng)排除的物質(zhì),，大小均勻，而微泡是由細(xì)胞直接出芽脫落生成,，大小不均一。黑龍江外泌體NTA

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