外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對(duì)如何準(zhǔn)確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過(guò)差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分,并在100000×g~200000×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體,。差速超速離心技術(shù)被認(rèn)為是外泌體分離的“金標(biāo)準(zhǔn)”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法,。該方法可通過(guò)結(jié)合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進(jìn)行超濾來(lái)提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉(zhuǎn)子類(lèi)型,、旋轉(zhuǎn)半徑,、沉降路徑長(zhǎng)度以及樣品黏度等多種因素影響。外泌體的提取的方式：色譜法,。植物外泌體提取試劑盒步驟

外泌體的提取分離方法：1,、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類(lèi)型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑,；此外，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量,。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時(shí),。植物外泌體提取試劑盒步驟外泌體可以通過(guò)多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。

外泌體的相關(guān)成分：1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層,。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide,、SM、PC,，限制膜流動(dòng),，參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6、外泌體中含有核酸,，包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,；同時(shí)還有一些蛋白、脂類(lèi)也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6,、PLD2、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU）,，進(jìn)行主動(dòng)包埋,。外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層,。

姜黃素的臨床應(yīng)用也存在著問(wèn)題,，比如其水溶性差,，在體內(nèi)代謝快速以及易被快速清chu。利用鼠淋巴瘤細(xì)胞系(EL-4)的外泌體作為姜黃素的載體,，可以提高姜黃素的溶解性,、穩(wěn)定性以及生物利用度，將姜黃素和載有姜黃素的外泌體腹膜內(nèi)注射到脂多糖(LPS)誘發(fā)的敗血性休克的小鼠模型中,，結(jié)果顯示經(jīng)外泌體運(yùn)載的姜黃素可促進(jìn)小鼠肺部抑制免疫反應(yīng)的CD11b+Gr-1+細(xì)胞的凋亡而表現(xiàn)出抗yan癥的效果,，而單純姜黃素的注射不能起到促進(jìn)CD11b+Gr-1+細(xì)胞的凋亡效果(與注射PBS的對(duì)照組類(lèi)似)。研究者還進(jìn)行了目前常用的脂質(zhì)體負(fù)載姜黃素,，與外泌體負(fù)載姜黃素對(duì)比,。脂質(zhì)體和外泌體均具備作為姜黃素的載體的能力，但外泌體由于其更易被Gr-1+細(xì)胞吞噬,，從而可以起到更好的zhiliao效果,。外泌體較有用的特性之一是它們穿過(guò)屏障（如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力。

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù),。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖,、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶,。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時(shí)樣品在向超速離心管底部移動(dòng)時(shí),會(huì)通過(guò)密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過(guò)密度更高的梯度層,更快地到達(dá)管底,因此控制離心的時(shí)間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會(huì)根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來(lái)進(jìn)行組合,離心過(guò)程中,無(wú)論離心時(shí)間多久,不同密度顆粒jin會(huì)富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會(huì)沉淀到底部,。外泌體作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體,。細(xì)菌外泌體提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長(zhǎng),、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過(guò)程,。植物外泌體提取試劑盒步驟

流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析,。但是由于外泌體的粒徑小,、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積,、增強(qiáng)反射,，操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM),，將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm,，能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè)，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè),，目前該儀器已商品化,。植物外泌體提取試劑盒步驟

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