所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲,,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),,不只是mRNA,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,,在進入靶細胞后可以靶向調(diào)節(jié)細胞中mRNA的水平,。神經(jīng)細胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子。外泌體 小膠細胞
外泌體大小不均可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷,,導致流體和固體的總含量不同,;細胞的微環(huán)境和固有的生物學特性可能會影響外顯體的含量及其生物學標記,如乳腺病細胞及其外泌體的蛋白質(zhì)組可以顯示來源細胞是上皮樣細胞還是間充質(zhì)樣細胞,;由于細胞表面受體表達的不同,,外泌體對受體細胞的影響可能不同,可能誘導細胞存活,,也可能誘導凋亡,,或誘導免疫調(diào)節(jié)等;異質(zhì)性也可以基于外泌體起源的組織,包括它們是否來自病細胞,,瘤細胞產(chǎn)生的外泌體傳遞致瘤miRNAs明顯促進瘤細胞增殖,。山東外泌體質(zhì)譜在抗原呈遞細胞中的外泌體發(fā)揮作用的報道后,人們對外泌體的興趣增強,。
液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術(shù),,能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉(zhuǎn)移過程中釋放到血液中的循環(huán)中流細胞(circulatingtumorcell,CTC),、循環(huán)中流DNA(circulatingtumorDNA,,ctDNA)和中流外泌體等中流組分。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成,,基于其內(nèi)容物成分多樣和穩(wěn)定等優(yōu)勢,,正成為中流標志物相關(guān)研究的熱點。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障,、天然的歸巢特性,、雙分子層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和高效的生物相容性等特征。因此,,中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體,,尤其是工程化外泌體更表現(xiàn)出很好的中流靶向干預和增強藥物zhiliao的效果。
外泌體的提取方法:免疫磁珠法,,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,,特異性高、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗,。PS親和法,,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度較高,。由于不使用變性劑,,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。PS法可提取相當高純度的外泌體,。色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,應用不寬泛。結(jié)果表明,,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA,。
外泌體有很多潛在優(yōu)勢,但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步,,尚有許多問題需解決:如何修飾外泌體的靶向性:缺氧瘤細胞來源的外泌體傾向于向缺氧瘤組織內(nèi)募集,;此外,還可通過在外泌體膜表面設(shè)計與靶細胞特異性結(jié)合的抗體,、配體或受體來實現(xiàn),。如何提高藥物裝載效率:目前主要有①前裝載方法(首先將藥物加載到母細胞中,隨后外泌體形成并包裹藥物分泌到細胞外,,常用的方法如轉(zhuǎn)染,、共孵育等);②后裝載方法(直接將藥物加載到外泌體中,,例如孵育,、電穿孔、超聲,、擠出,、凍融循環(huán)等);③其他裝載方法(主要是通過生物工程修飾母細胞來實現(xiàn)),。如何實現(xiàn)外泌體的大量生產(chǎn):目前大規(guī)模生產(chǎn)外泌體的方法主要是自發(fā)生產(chǎn)和非自發(fā)生產(chǎn),。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。外泌體是什么的
外泌體提純方法中,,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì),。外泌體 小膠細胞
各種細胞粘著分子在外泌體膜表面表達,由其決定外泌體被運輸往哪一種細胞,,期望開發(fā)利用該特征的新型DDS,。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會分解,。另外在從體液中提取外泌體后,,體液可長期穩(wěn)定保存,因此外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標記,。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測出,,特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體,其與正常細胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目,,并作為癥狀早期診斷技術(shù),,應用于與癥狀進展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟,、前列腺疾病,、膀胱疾病的新型診斷標記,,髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標記物。外泌體 小膠細胞
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