外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,還有研究表明,,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),,NY-ESO-1是單獨(dú)對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,,其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),,let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān),。外泌體可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈,、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化等方方面面,。血清外泌體提取試劑盒廠家
外泌體的提取方法:超速離心法,,這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多,,但是純度不足,,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),,也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過(guò)濾離心法,,這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí),不會(huì)影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問(wèn)題,。密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期的準(zhǔn)備工作繁雜,比較耗時(shí),,量少,。外泌體活細(xì)胞是什么外泌體分析會(huì)引起何種生理作用,這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向,。
在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過(guò)基因操作即可對(duì)PTX運(yùn)輸,,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,而后將SR4987與PTX共混,,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來(lái),研究其對(duì)體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響,。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能,,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對(duì)體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng),。
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,,參與細(xì)胞間通訊,,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā),。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂,。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),,不只是mRNA,,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平,。有報(bào)導(dǎo)指出,,外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過(guò)程,。
瘤釋放的外泌體可以通過(guò)削弱免疫效應(yīng)細(xì)胞的反應(yīng)和激發(fā)免疫抑制細(xì)胞的擴(kuò)增,,來(lái)營(yíng)造一個(gè)免疫抑制的環(huán)境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細(xì)胞接受免疫系統(tǒng)的攻擊,,從而幫助瘤細(xì)胞逃過(guò)免疫系統(tǒng)的識(shí)別,。瘤釋放的外泌體可以引發(fā)炎癥,利用基質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞的反應(yīng)營(yíng)造出利于瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境,。研究表明,,在過(guò)去短短的5年里,對(duì)外泌體的研究已經(jīng)取得了比較好的的進(jìn)展,。如今,,收集并分析瘤釋放的外泌體已經(jīng)成為液體活檢的一個(gè)重要研發(fā)方向,。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對(duì)改善病癥患者的命運(yùn)發(fā)揮出舉足輕重的影響。外泌體具有良好的生物兼容性,、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性,,使其在藥物遞送方向大有潛力。吉林外泌體PKH67
關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),,關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多,。血清外泌體提取試劑盒廠家
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200nm,,形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性,。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA)是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200nt、不編碼蛋白的RNA,。近年來(lái)的研究表明lncRNA能在標(biāo)貫遺傳,、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá),參與了X染色體沉默,、基因組印記以及染色質(zhì)修飾,、轉(zhuǎn)錄jihuo、轉(zhuǎn)錄干擾,、核內(nèi)運(yùn)輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過(guò)程,,與人類(lèi)疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系,。lncRNA芯片對(duì)lncRNA進(jìn)行功能研究也被更多的關(guān)注,,通過(guò)設(shè)計(jì)不同的lncRNA探針,可以更加快速,、高通量地篩選出疾病或特定生物學(xué)過(guò)程中差異表達(dá)的lncRNA和mRNA信息,,找到lncRNA的靶基因位點(diǎn)深入分析調(diào)控機(jī)制。血清外泌體提取試劑盒廠家