雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢,，但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法,，但這種方法費時費力且提取效率較低,，難以進(jìn)行臨床推廣和應(yīng)用,；而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊,，往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過多，且其售價較高,。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量,，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量,，目前仍存有爭議,。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體，在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級階段,。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高。外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型,、目標(biāo)組織的特點等進(jìn)行針對性的調(diào)整,。血液外泌體miRNA測序

一類外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,，有文獻(xiàn)報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白,。除了RAB蛋白,，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2,、4,、5、6,、7,、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易?、熱休克蛋白家族,。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶、核糖體蛋白（RPS3）,、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細(xì)胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）,、粘附因子、細(xì)胞骨架蛋白以及泛素等,。杭州CD81外泌體慢病毒包裝近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻(xiàn)中介紹,，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間,，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來,。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進(jìn)一步純化胎盤相關(guān)外泌體,，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h,，將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀,。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證，確定同時表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層,。

由于特殊的結(jié)構(gòu)和循環(huán)方式,，外泌體作為藥物運輸?shù)妮d體具有獨特的優(yōu)勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強(qiáng)滲透滯留效應(yīng),，從而有選擇性地深入中流組織;其外層磷脂雙分子層可以保護(hù)內(nèi)容物不受各種生物酶的影響,，維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中，其體積小,，結(jié)構(gòu),、組成與細(xì)胞膜類似，導(dǎo)致外泌體可以在避開免疫系統(tǒng)監(jiān)督的同時深入組織內(nèi)部,，有較好的生物相容性;當(dāng)采用內(nèi)源外泌體時,，能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應(yīng);除此之外,，某些細(xì)胞來源或經(jīng)特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性，可以與特定的qi官或組織結(jié)合,。幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,，回收量高，操作重復(fù)性好,。

外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,，快速直達(dá)基底層起效；富含100+多種胞外基質(zhì)蛋白,、胞外基質(zhì)酶以及細(xì)胞黏附分子,；能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）中I型膠原蛋白、成纖維蛋白,，促進(jìn)皮膚有效快速再生（Rejuvenation）,；能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）彈性蛋白生成，保持皮膚飽滿和彈性,；有效降低皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質(zhì)中IIIIII型膠原蛋白被降解,；富含活性物質(zhì)能夠促進(jìn)皮膚有些血管的修復(fù)與重建再生。日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白,，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”,。組織外泌體提取試劑盒

以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取,。血液外泌體miRNA測序

外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族,、脂膜,、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板,、磁珠,、二氧化硅、樹脂,、膜親和過濾器,、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上,。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等,。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá),也可以瞬時讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來,。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率,。血液外泌體miRNA測序