定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué)：蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾，它與信號傳導(dǎo),、細(xì)胞周期,、生長發(fā)育機(jī)理等諸多生物學(xué)問題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義,。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合,，實現(xiàn)對磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究,。技術(shù)原理：在磷酸化肽段富集前先進(jìn)行 iTRAQ/TMT 標(biāo)記，然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,，之后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對樣品的定量分析,。質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。北京蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)價錢
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的研究策略：目前,，有幾種分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾的策略，包括質(zhì)譜（MS）,、Eastern blotting,、放射性標(biāo)記和Western blotting。放射性標(biāo)記和Western blotting是比較傳統(tǒng),、特異性和相對定量的方法,。該過程需要事先知道翻譯后修飾類型。局限性包括抗體的特異性和可用性,。質(zhì)譜技術(shù)也常被用于翻譯后修飾分析,，不受修飾類型和相關(guān)修飾位點的現(xiàn)有知識的限制。自下而上：自下而上的技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中使用的質(zhì)譜策略之一,。在根據(jù)序列鑒定肽之前,，需要使用蛋白酶消化蛋白質(zhì)。由于該技術(shù)不能保證在檢測過程中被檢測肽的完整性和穩(wěn)定性,，因此無法獲得不同蛋白質(zhì)翻譯后修飾之間關(guān)系的信息,，這意味著它無法檢測到某些修飾。因此,，該方法不適用于分析組蛋白的組合翻譯后修飾,。北京蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)價錢蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略：常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有：a. 凝集素親和技術(shù),；b. 肼化學(xué)富集；c. 親水性相互作用色譜法,；d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng),。基于質(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有：a. PNGase F酶法,；b. Endo H酶法,；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽,，在真核生物中高度保守,，可通過異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記，泛素用親和標(biāo)簽（通常為6xHis）進(jìn)行標(biāo)記,，并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白,。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu)，經(jīng)胰蛋白酶水解后,，Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,，使肽的質(zhì)量增加114，因此可作為泛素定位位點的質(zhì)量標(biāo)記,。用HPLC對樣品進(jìn)行預(yù)分離,，使用針對特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度,。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點,。
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機(jī)制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙酰化,磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設(shè)計抑制劑,用于疾病的診療,。翻譯后修飾可以發(fā)生在蛋白質(zhì)生命周期的任何階段,。
蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)：乙?；揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?，將乙酰CoA的乙酰基基團(tuán)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上,。蛋白質(zhì)乙酰化也是一種可逆的酶促反應(yīng)過程,。乙?；D(zhuǎn)移酶可以將乙酰基團(tuán)(CH3C=O)從乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),。同理,去乙?；竸t可以逆轉(zhuǎn)這種反應(yīng)。蛋白質(zhì)上的賴氨酸乙?；羌?xì)胞內(nèi)一種重要的PTMs過程,。不僅發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等上,，在細(xì)胞質(zhì)和線粒體中也存在著諸多蛋白的乙?；揎棥Ｔ谥参镅芯款I(lǐng)域內(nèi),，乙?；揎椫饕獏⑴c植物光合作用、生長發(fā)育,、脅迫響應(yīng)等過程,。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，乙酰化修飾可調(diào)節(jié)人體內(nèi)某種代謝酶,，控制糖尿病,，這一發(fā)現(xiàn)為糖尿病干預(yù)與療理帶來新的希望。蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,，蛋白會首先被酶切成肽段,，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。濟(jì)南乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性,。北京蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)價錢
蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應(yīng)該注意些什么問題,？覆蓋率：覆蓋率越高,，檢測和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,，則檢測到修飾肽的機(jī)會會隨之減少,。如果百分比較高（> 30％），則有助于識別修飾位點,。棕櫚?；鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚酰化的主要功能是促進(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合,。蛋白質(zhì)可以由一個棕櫚?；M成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),，如豆蔻?；Ｓ捎趯-棕櫚?；鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性,，由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?；?。北京蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)價錢