蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,,然后通過高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,,通過相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫檢索匹配,,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,并通過軟件完成數(shù)據(jù)檢索,。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,,富集效率好。磷酸化修飾蛋白質(zhì)組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸,、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化,。哈爾濱蛋白質(zhì)丙二酰化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析
琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組鑒定:蛋白質(zhì)琥珀?;揎検切陆l(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是在琥珀酰輔酶 A 的介導(dǎo)下將一個(gè)負(fù)電荷四碳琥珀?;D(zhuǎn)移到賴氨酸殘基的伯胺上的過程,。賴氨酸琥珀酰化在真核細(xì)胞及原核細(xì)胞中普遍存在,,參與調(diào)控包括三羧酸循環(huán),,氨基酸代謝以及脂肪酸代謝在內(nèi)的多個(gè)代謝信號通路。琥珀?;鞍踪|(zhì)組以組織,、細(xì)胞等較為復(fù)雜樣本為研究對象,目的在于鑒定樣品中發(fā)生琥珀?;揎椀牡鞍踪|(zhì)以及相應(yīng)的琥珀?;揎椢稽c(diǎn)。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,,特異性高,富集效率好,。蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)方法質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化。
甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:目前用于甲基化蛋白質(zhì)組分析的甲基化肽段富集抗體分為精氨酸甲基化(Me-R)抗體和賴氨酸甲基化(Me-K)抗體兩大類,。根據(jù)氨基酸殘基上所含甲基化修飾基團(tuán)數(shù)量的不同,,精氨酸甲基化(Me-R)抗體又包括:單甲基化精氨酸(MMA)抗體、非對稱二甲基化精氨酸(ADMA)抗體和對稱二甲基化精氨酸(SDMA)抗體,;賴氨酸甲基化(Me-K)抗體又包括:賴氨酸單甲基化(K-Me)抗體,、賴氨酸二甲基化(K-2Me)抗體和賴氨酸三甲基化(K-3Me)抗體。其中,Me-R的各類抗體需要單獨(dú)使用,,而Me-K抗體可以混合使用,。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的介紹:泛素由76個(gè)氨基酸組成,高度保守,,普遍存在于真核細(xì)胞內(nèi),,故名泛素。泛素化是可逆的,,依賴ATP并且通過泛素刺激酶E1,,泛素結(jié)合酶E2,泛素連接酶E3一系列催化反應(yīng)所致,。這些特殊的酶包括泛素酶,,結(jié)合酶、連結(jié)酶和降解酶等,。泛素化在蛋白質(zhì)的定位,、代謝、功能,、調(diào)節(jié)和降解中都起著十分重要的作用,。同時(shí),它也參與了細(xì)胞周期,、增殖,、凋亡、分化,、轉(zhuǎn)移,、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),、信號傳遞,、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控,。泛素化,、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn),。蛋白質(zhì)磷酸化修飾怎么定義,?
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點(diǎn)?蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈,。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da,。之后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段,并通過MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫,,確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列,,從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,,特異性高,富集效率好,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加,。哈爾濱甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過程。哈爾濱蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜分析
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向有什么?1,、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷:生物標(biāo)志物,,疾病機(jī)理機(jī)制,,疾病分型,個(gè)性化治理等,;2,、生物醫(yī)藥:藥物作用機(jī)理,藥效評價(jià),,藥物開發(fā)等,;3、微生物領(lǐng)域:致病機(jī)理,,耐藥機(jī)制,,病原體-宿主相互作用研究等;4,、海洋水產(chǎn):漁業(yè)資源,,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等,;5,、生物能源、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域:發(fā)酵過程優(yōu)化,,生物燃料生產(chǎn),,環(huán)境危定風(fēng)險(xiǎn)評估研究等;6,、食品營養(yǎng):食品儲(chǔ)藏及加工條件優(yōu)化,,食品組分及品質(zhì)鑒定,,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測等,。哈爾濱蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜分析