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濟(jì)南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-12-30

翻譯后修飾蛋白的檢測方法:翻譯后修飾蛋白的檢測技術(shù)包括有免疫沉淀,、western blot、質(zhì)譜技術(shù),、體外生化分析等,。其中,,免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測中的關(guān)鍵步驟,它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標(biāo)蛋白,,之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標(biāo)蛋白,。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測,其中Western blot相對(duì)簡單但依賴于特異性抗體且無法識(shí)別單個(gè)蛋白質(zhì)變化,,質(zhì)譜則可以檢測包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識(shí)來分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù),。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體,,以及有沒有目標(biāo)等選擇合適的方法進(jìn)行檢測,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過程。濟(jì)南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù):糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位,。在糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合,。蛋白質(zhì)經(jīng)過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對(duì)蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作用,。凝素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法,。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來,。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。哈爾濱蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)費(fèi)用各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過程,。它通過在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理,、化學(xué)性質(zhì),,進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位,、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生,。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量,。

什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,?蛋白質(zhì)的翻譯后修飾()是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來說,,這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟,。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分,。通過向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟,。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能,。這個(gè)過程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,并影響表觀遺傳學(xué),。在細(xì)胞中,,乙酰化修飾的反應(yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,,將乙酰輔酶A的乙酰基轉(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上,。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一,。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活,、可逆的特性,,以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種普遍的調(diào)控手段,。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,,幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育,、分化,、細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞凋亡,、神經(jīng)活動(dòng),、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動(dòng)的過程,,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式,。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果,。蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾,?江蘇磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程。濟(jì)南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價(jià)鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合,,調(diào)控著底物的酶活性,、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生,。通過實(shí)驗(yàn)的方法鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾的位點(diǎn)需要耗費(fèi)大量的資金和時(shí)間,并且酶反應(yīng)的優(yōu)化常常難以實(shí)現(xiàn)。而計(jì)算的方法則能夠快速,、準(zhǔn)確的預(yù)測酶特異性的底物蛋白質(zhì)及其修飾位點(diǎn),。濟(jì)南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析

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