蛋白質(zhì)組學主要以全蛋白組(組織、細胞),、線粒體蛋白組,、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,,通過對蛋白組進行定性、定量,、分子功能分析,、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能,、作用機制,、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系,。蛋白質(zhì)組學可以克服核酸水平預測的不確定性,、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),,高通量定量蛋白組(Labelfree,、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學,。蛋白質(zhì)組學技術有生物質(zhì)譜,。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學研究內(nèi)容
蛋白質(zhì)組學發(fā)展趨勢:技術發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學的研究方法將出現(xiàn)多種技術并存,各有優(yōu)勢和的特點,,而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法,。除了發(fā)展新方法外,更強調(diào)各種方法間的整合和互補,,以適應不同蛋白質(zhì)的不同特征,。另外,蛋白質(zhì)組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要,,這種交叉是新技術新方法的活水之源,,特別是,蛋白質(zhì)組學與其它大規(guī)??茖W如基因組學,,生物信息學等領域的交叉,構成組學(omics)生物技術研究方法,,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(SystemBiology)研究模式,,將成為未來生命科學比較令人激動的新前沿。廣東Label free多肽組學研究蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別,。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨,、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,,用Q1選擇目標肽段的母離子,,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息,。這樣能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì)、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質(zhì)/肽段進行相對(一定)定量,。從而實現(xiàn)對復雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準確地特異性分析,。
常規(guī)蛋白質(zhì)組學:Labelfree多肽組學:顧名思義,就是不使用任何標記方法,,直接對肽段進行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析,。實驗流程簡單,只需要對蛋白進行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機,。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計數(shù)(Spectralcount),,常用的是峰面積。不過,,由于質(zhì)譜采集時只選取topN的母離子進行二級碎裂和MS2檢測,,所以會丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多,。TMT/iTRAQ標記定量蛋白組學:TMT全稱是TandemMassTag,,是經(jīng)典化學標記試劑,普遍用于差異表達蛋白質(zhì)組分析研究中,。該技術采用6重,、10重或16重同位素標簽,與肽段的氨基發(fā)生共價結合反應,,可實現(xiàn)同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析,。(目前16標鹿明生物可提供技術服務)。蛋白質(zhì)組學是以蛋白質(zhì)組為研究對象,,研究細胞,、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學。
蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎,,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑,。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,,它們可成為新藥物設計的分子靶點,,或者也會為疾病的早期診斷提供分子標志。確實,,那些世界范圍內(nèi)銷路比較好的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點為某種蛋白質(zhì)分子,。因此,蛋白質(zhì)組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作,,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益,。蛋白質(zhì)組學的研究是生命科學進入后基因時代的特征。生物質(zhì)譜技術是蛋白質(zhì)組學研究中比較重要的鑒定技術,。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學研究內(nèi)容
蛋白質(zhì)組學包括翻譯后的修飾,。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學研究內(nèi)容
蛋白組學研究怎么做,?PRM:平行反應監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術,,能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì),、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白質(zhì)/肽段進行一定定量,,因此也被稱之為基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB),。PRM技術基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺,,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,,之后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息,。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準確地特異性分析。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學研究內(nèi)容
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