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武漢定量蛋白組學(xué)研究方法

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-21

PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的,?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,,設(shè)計(jì)和建立針對這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,,然后對待測樣品進(jìn)行PRM數(shù)據(jù)采集,,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進(jìn)行定量,。另外,,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,用PRM額外做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,,即可實(shí)現(xiàn)一定的定量,。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面,?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。具體說來,,比如驗(yàn)證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,,針對蛋白修飾位點(diǎn)的定量,,想同時(shí)定量多個(gè)蛋白的情況等,都可以用PRM來做,。蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),,也是一個(gè)整體的概念。武漢定量蛋白組學(xué)研究方法

LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):在非標(biāo)記策略的定量模型中,主要涉及兩種不同的算法:其一,,以肽段的色譜峰積分面積為基礎(chǔ),,通過比較一對生物樣品中相對應(yīng)到蛋白質(zhì)酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對豐度;其二,,以肽段被質(zhì)譜檢測的計(jì)數(shù)為基礎(chǔ),,通過歸一化來表征被檢測蛋白質(zhì)的相對豐度。非標(biāo)記技術(shù)認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率(Counts)與其在混合物中的豐度成正相關(guān),,因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,,通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,。哈爾濱蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,。

PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):產(chǎn)品分類:a.相對定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa),。技術(shù)優(yōu)勢:(1)無需抗體,,可直接對樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。(2)高特異性,、準(zhǔn)確度和靈敏度,,靶向檢測目標(biāo)蛋白對應(yīng)的多個(gè)unique肽段。(3)通量高,,可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)幾十個(gè)蛋白的定量檢測,。樣本要求:動物及臨床組織標(biāo)本100mg/sample,血清,、血漿200μL/sample,,細(xì)胞、微生物1×107cells/sample,。應(yīng)用方向:驗(yàn)證修飾和非修飾定量蛋白組學(xué)結(jié)果,;目標(biāo)蛋白相對定量和一定定量分析。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時(shí)代的科學(xué)研究,,針對基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測與定量,。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:特點(diǎn):(1)不同樣本標(biāo)記之后混樣,統(tǒng)一處理上機(jī),,減少了分別上機(jī)造成的實(shí)驗(yàn)誤差,,并利用同位素標(biāo)簽的豐度來檢測,定量更準(zhǔn)確,,重復(fù)性更好,;(2)由于需要標(biāo)記試劑標(biāo)記,因此成本相對較高,;(3)通量高,,在一次實(shí)驗(yàn)中比較多可同時(shí)比較8個(gè)樣品;(4)利用基于同一個(gè)參考樣品的辦法,可以進(jìn)行多于8個(gè)樣品的定量比較,;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高,。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:Label-Free定量,,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),不需要對比較樣本做特定標(biāo)記處理,,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達(dá)量的變化,,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作,。

蛋白質(zhì)組學(xué):對人類而言,,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類的健康,主要指促進(jìn)分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展,。如尋找藥物的靶分子,。很多藥物本身就是蛋白質(zhì),而很多藥物的靶分子也是蛋白質(zhì),。藥物也可以干預(yù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和疾病機(jī)理研究中,了解人不同發(fā)育,、生長期和不同生理,、病理?xiàng)l件下及不同細(xì)胞類型的基因表達(dá)的特點(diǎn)具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關(guān)的分子,,進(jìn)一步為設(shè)計(jì)作用于特定靶分子的藥物奠定基礎(chǔ),。蛋白質(zhì)組學(xué)包括翻譯后的修飾。濟(jì)南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,。武漢定量蛋白組學(xué)研究方法

蛋白質(zhì)組學(xué)概念:蛋白質(zhì)組學(xué)(英語:proteomics,,又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)),是以蛋白質(zhì)組為研究對象,,研究細(xì)胞,、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的組合,,意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì),。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,,翻譯后的修飾,,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過程的整體而全方面的認(rèn)識,。武漢定量蛋白組學(xué)研究方法

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