熒光的產(chǎn)生：一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲(chǔ)存能量（如光能、化學(xué)能等）而進(jìn)入激發(fā)態(tài),，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí),，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光）。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光,；而一旦停止供能,，發(fā)光（熒光）現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失?？梢砸鸢l(fā)熒光的能量種類很多,，由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光,，由X線或陰極射線引起的分別稱為X線熒光或陰極射線熒光,。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。免疫熒光技術(shù)通過熒光信號(hào)的觀察來確定抗原或抗體的分布和定位,。ucp2免疫熒光

細(xì)胞的固定及免疫熒光：1)吸除培養(yǎng)基,，一般先加入PBS浸洗細(xì)胞 3 次，每次 5 min,。2)向孔內(nèi)加入4%多聚甲醛1ml，進(jìn)行細(xì)胞固定,，室溫固定20分鐘,。3)吸去多聚甲醛，使用PBS浸洗 3 次,，每次 5 min,。4)向孔內(nèi)加入0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min，目的是使細(xì)胞通透,。5) 除去Triton X-100,，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min,。6)用10%的與二抗同源的山羊血清(PBS配制)或者5%BSA封閉2小時(shí)（選擇的封閉液與后面操作過程中抗體稀釋液一致）,。封閉后不需要用PBS清洗。7)吸去封閉液,，向每孔滴加足夠量適宜濃度的一抗（一次使用抗體可以根據(jù)抗體說明書推薦濃度,，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可以摸索抗體的適宜濃度）,，4℃濕盒內(nèi)孵育過夜。VEGF免疫抗體免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞凋亡和細(xì)胞存活,。

免疫熒光注意事項(xiàng)：對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置：1,、內(nèi)源性組織背景對(duì)照：某些細(xì)胞和組織可能有固有的生物學(xué)性質(zhì)，會(huì)產(chǎn)生背景熒光,，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響,，例如色素脂褐質(zhì)。因此在孵育一抗前,，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行觀察,，確保抗原本身沒有信號(hào),。2,、陽性對(duì)照：用確認(rèn)含有待測(cè)抗原的組織或細(xì)胞，與待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)一處理,，結(jié)果應(yīng)為陽性,，可證明待測(cè)抗原有一定活性并且實(shí)驗(yàn)過程中用的試劑及方法均可靠。3,、陰性對(duì)照：與陽性對(duì)照相反,，用明確不含有待測(cè)抗原的細(xì)胞或組織切片染色，結(jié)果若為陰性,，可排除染色過程中由于非特異性染色造成的假陽性結(jié)果,。

直接免疫熒光：?jiǎn)慰贵w（一抗）用于免疫染色和檢測(cè)目標(biāo)蛋白。熒光素結(jié)合的一抗直接與目標(biāo)抗原結(jié)合,，并使用成像顯微鏡觀察,。直接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn)：由于無需為兩種抗體選擇不同的物種反應(yīng)性，從而降低了物種交叉反應(yīng)性問題,。與間接免疫熒光相比,，時(shí)間縮短（操作步驟減少）。直接免疫熒光的缺點(diǎn)：不允許通過二抗進(jìn)行信號(hào)放大,；檢測(cè)靈敏度降低,；熒光素結(jié)合一抗的選擇有限；與使用熒光二抗的檢測(cè)相比,，更昂貴,。間接免疫熒光：使用兩種抗體（一抗和二抗）進(jìn)行免疫染色并檢測(cè)目標(biāo)蛋白。首先,，用特異性一抗標(biāo)記目標(biāo)蛋白,。然后，熒光素結(jié)合的二抗（與一抗具有不同的物種反應(yīng)性）識(shí)別結(jié)合的抗原-抗體復(fù)合物并與一抗結(jié)合。由于一個(gè)以上的二抗可以與一抗結(jié)合,，熒光信號(hào)被放大,，提供了更高的檢測(cè)靈敏度。免疫熒光技術(shù)可以用于研究食品安全和生物安全,。

免疫熒光間接法測(cè)抗體實(shí)驗(yàn)步驟：滴加0.01mol/L,，pH7.4的PBS于已知抗原標(biāo)本片，10min后棄去,，使標(biāo)本片保持一定濕度,。滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS適當(dāng)稀釋的待檢抗體標(biāo)本,，覆蓋已知抗原標(biāo)本片,。將玻片置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，37℃保溫30min,。取出玻片,，置于玻片架上，先用0.01mol/L,，pH7.4的PBS沖洗1-2次,，然后按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡,，每缸5min,，不時(shí)振蕩。取出玻片,，用濾紙吸去多余水分,，但不使標(biāo)本干燥，滴加一滴一定稀釋度的熒光標(biāo)記的抗人球蛋白抗體,。將玻片平放在有蓋搪瓷盒內(nèi),，37℃保溫30min。重復(fù)操作3,。取出玻片,，用濾紙吸去多余水分，滴加一滴緩沖甘油,，再覆以蓋玻片。熒光顯微鏡高倍視野下觀察,，結(jié)果判定同直接法,。免疫熒光技術(shù)在免疫學(xué)研究中發(fā)揮重要作用，幫助揭示細(xì)胞和分子的功能和相互關(guān)系,。CD34免疫組化IHC

免疫熒光技術(shù)可以用于研究環(huán)境污染和毒物作用,。ucp2免疫熒光

免疫熒光技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快,。主要缺點(diǎn)是：非特異性染色問題尚未完全解決，結(jié)果判定的客觀性不足,，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜,。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同，還可進(jìn)一步分做若干種,。與放射免疫法相比,，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡(jiǎn)便,，便于推廣,。國(guó)外生產(chǎn)的TDM用試劑盒，有相當(dāng)一部分即屬于此類,，并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動(dòng)分析儀生產(chǎn),。由于一般熒光測(cè)定中的本底較高等問題，熒光免疫技術(shù)用于定量測(cè)定有一定困難,。新發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測(cè)定,，與酶免疫測(cè)定和放射免疫分析一樣，在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用,。ucp2免疫熒光

上海睿寶和生物科技有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,，先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn)，在發(fā)展過程中不斷完善自己,，要求自己,，不斷創(chuàng)新，時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,，在上海市等地區(qū)的商務(wù)服務(wù)中匯聚了大量的人脈以及**,，在業(yè)界也收獲了很多良好的評(píng)價(jià),，這些都源自于自身的努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,，這些評(píng)價(jià)對(duì)我們而言是比較好的前進(jìn)動(dòng)力，也促使我們?cè)谝院蟮牡缆飞媳３謯^發(fā)圖強(qiáng),、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神，努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度,，在全體員工共同努力之下,，全力拼搏將共同上海睿寶和生物科技供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來，創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品,，我們將以更好的狀態(tài),，更認(rèn)真的態(tài)度,，更飽滿的精力去創(chuàng)造,，去拼搏,，去努力，讓我們一起更好更快的成長(zhǎng),！