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來源: 發(fā)布時間:2022-01-24

酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,。

· CCK8可以檢測大腸桿菌,,但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染,,以免影響結(jié)果,。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月,在-20℃下避光可以保存1年,。

· 當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時,,培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),由于體積不準確而增加誤差,。一般情況下,,**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS,不作為測定孔用,。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8,,培養(yǎng)一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照,。在做加藥實驗時,,還應考慮***的吸收,可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,,培養(yǎng)一定的時間,,測定450 nm的吸光度作為空白對照。 那它的用途也就大致可以猜到,,和細胞增殖,、細胞毒性相關(guān)的實驗都可以。湖北cck8 pw

CCK8檢測原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(37℃,5%CO2)。2,、細胞處理(不同實驗處理方式不同),。3、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,,它們會影響OD值的讀數(shù)),。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。5,、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6,、若暫時不測定OD值,,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,,吸光度不會發(fā)生變化。天津懸浮細胞 cck8cck8試劑盒原理是什么a?

細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定,,常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn),,如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響,,基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標準來證明作用效果。所以,,***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞,,設(shè)置對照組(細胞+無血清培養(yǎng)基),、實驗組和空白組(無血清培養(yǎng)基),可以采用如下圖的排版方式:2,、在對照組和實驗組中,,

細菌***對CCK8檢測的影響:我們做***的,經(jīng)常會做到細菌或***對細胞的影響,。那這種情況下我們應該怎么辦,。其實細菌防御系統(tǒng)還是非常強大,單獨和CCK-8在一起孵育時,,不會發(fā)生還原反應,,幾乎不會和細菌發(fā)生顯色反應。而細菌不需要入胞繁殖,,所以結(jié)果還是可信的,。**討厭的就是***,我不知道有多少人是做***的,。***是需要入胞繁殖的,,而且需要借助細胞的東西來進行繁殖。繁殖過程中就需要消耗宿主的能量,,會產(chǎn)生氧化還原反應,,所以我用CCK-8來測定***對細胞活性的影響或者某個***對***復制的影響時,,我都小心翼翼的測很多個時間點,說實話,,效果不是很好,。所以我比較喜歡中性紅。在電子耦合試劑(也就是細胞是活的,,有呼吸,,有能量代謝).

在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時,對于大多數(shù)情況孵育2小時左右就可以了,。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度(使用酶標儀之前要提前開啟10min預熱)測定完成后,,保存數(shù)據(jù)。7.連續(xù)五天檢測,,每天保持一樣的時間點加入CCK-8溶液,,在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育時間相同。注:若暫時不測定OD值,,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,,吸光度不會發(fā)生變化,。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉***影響,。當然***影響比較小的情況下,,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。CCK-8試劑中含有WST–8.上海cck8淋巴細胞增殖實驗

MTT與CCK8比色法的實驗細節(jié)和注意事項.湖北cck8 pw

氧化還原試劑對CCK8測定的影響:CCK8是一個氧化還原反應實驗,,在整個操作當中,如果有氧化還原試劑都會影響**終的結(jié)果,。當有還原性物質(zhì)存在時會影響CCK8的測定,,增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時會***測定反應的發(fā)生,,減少OD值,。在高中化學我們就知道金屬是氧化還原反應中的重要參與者。各個公司都會告訴你:“終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應,,使靈敏度降低,。如果終濃度是10mM的話,將會*****,?!蔽?*開始看到這句話時很懵,因為不知道在操作中怎樣會遇到這種情況,。下面就分享我能想到或者在操作中真實遇到的,。湖北cck8 pw