四,、方法及步驟：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析1、制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計(jì)數(shù),。2,、接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細(xì)胞數(shù)（約1-2×104），每孔約100ul細(xì)胞懸液,，同樣的樣本可做4-6個(gè)重復(fù),。3、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)4小時(shí),，如果不需要貼壁,，這步可以省去。4,、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少,，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差，建議將***頭浸入培養(yǎng)液中加入且在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻,?；蛘咧苯优渲煤?0%CCK8的培養(yǎng)基（現(xiàn)用現(xiàn)配），以換液的形式加入,。請(qǐng)問(wèn)合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?北京mts cck8

,。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測(cè)定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照,。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照,。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%,、15%、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降級(jí),。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)*****,。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,。湖北cck8孵育時(shí)間CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原理.

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢,，因?yàn)檫@里沒(méi)有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低,，有些細(xì)胞在***處理后，可能活細(xì)胞數(shù)不變,，但是代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少,，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少,，所以此時(shí)怎么算呢（此時(shí)我就比較懷戀中性紅了）？當(dāng)然也有解決的辦法,，下期給大家介紹,。因此可利用這個(gè)原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時(shí)檢測(cè)讀數(shù),。顏色也會(huì)越深

特點(diǎn)不同1,、CellCountingKit-8：靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好,；操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力,；水溶性,，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞,；無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑,，對(duì)細(xì)胞毒性低；適合于高通量***篩選,。2,、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì),。三,、應(yīng)用不同1、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn),。2,、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗*****篩選,、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測(cè)定等,。不同的種板數(shù)對(duì)檢測(cè)***的IC50影響大嗎,？

酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾；◆細(xì)胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測(cè)定時(shí)間。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1,、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5%CO2）,。2,、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6,、12、24或48小時(shí)）,。4,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。6,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化,，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.江蘇cck8和mtt的比較

用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。北京mts cck8

CCK8原理,、優(yōu)勢(shì)和步驟 檢測(cè)原理：

◆ Cell Counting Kit簡(jiǎn)稱CCK試劑盒,，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

◆ WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品,，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下,，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,，與細(xì)胞毒性成反比,。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,，間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。 北京mts cck8