培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會(huì)增加空白吸收,，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可,，可見(jiàn)空白孔非常重要,，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外,，血清不影響測(cè)定,。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí)，多加了這個(gè)***劑的濃度,，無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑,，對(duì)細(xì)胞毒性低.江蘇cck8 graphpad 作圖

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，上海cck8結(jié)果圖怎么做在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）.

二、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便,，省去了洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；·CCK-8法能快速檢測(cè),；·CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高,，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT法,，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的,，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的,，不但省去了溶解步驟,，更因此而減少了該操作步驟帶來(lái)的誤差；·CCK-8法對(duì)細(xì)胞毒性小,，可以多次測(cè)定選取比較好測(cè)定時(shí)間,，與MTT方法相比線(xiàn)性范圍更寬，靈敏度更高,；·CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中為1瓶溶液,，毋需預(yù)制，即開(kāi)即用,。

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí)請(qǐng)問(wèn)合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?

7,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà),，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。活力計(jì)算：保存條件：4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效,。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。湖北cck8同仁

CCK-8 反復(fù)凍融會(huì)增加背景值,，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定。江蘇cck8 graphpad 作圖

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享： 

CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀,，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到,。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值,。但無(wú)論如何,，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶,，這個(gè)懶不得,，否則你都只是在做無(wú)用功。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提,， 如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。

摸條件包括1、種板數(shù),；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；3,、加藥后的孵育時(shí)間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,。看起來(lái)很多,，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板，也就是不加***,，只加細(xì)胞和CCK8,。 江蘇cck8 graphpad 作圖