CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見說明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少。天津cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)計(jì)算

沒有做過MTT實(shí)驗(yàn),，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）,。都說CCK8簡單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個(gè)試劑盒,。CCK8的說明書大家一定要認(rèn)真閱讀,，里面很多細(xì)節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值,，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過的比較好數(shù)值,。但無論如何，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件,。你就算再懶,，這個(gè)懶不得，否則你都只是在做無用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提,，如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。浙江dmso在cck8的溶劑對(duì)照化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).

CCK法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較檢測(cè)方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜產(chǎn)物的水溶性差（需加有機(jī)溶劑溶解再檢測(cè)）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用檢測(cè)靈敏度高很高很高高檢測(cè)時(shí)間較長較短較短**短檢測(cè)波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細(xì)胞毒性高,，細(xì)胞形態(tài)完全消失很低,，細(xì)胞形態(tài)不變很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變?cè)噭┓€(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測(cè)可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷

CCK8,，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一,、原理不同1,、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2,、MTT法：其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中,，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜,，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長處測(cè)定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。科研狗**值錢的就是時(shí)間,不能再被CCK8“拖累”了.

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的方法：

1.將處于對(duì)數(shù)生長期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化后,，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液,，并計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)細(xì)胞生長快慢決定鋪板細(xì)胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well）,，每組3-5重復(fù),，每孔100-200μl培養(yǎng)基,。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量（如需要檢測(cè)5天，則鋪5張96孔板）,，我們以1000 cell/well,，5復(fù)孔，200μl培養(yǎng)基,，檢測(cè)5天為例,，各實(shí)驗(yàn)組需要細(xì)胞數(shù)量為1000×5×5個(gè)細(xì)胞，從計(jì)數(shù)好的細(xì)胞懸液中取出所需的細(xì)胞量和完全培養(yǎng)基混勻,，**終體積為200×5×5μl,。 CCK8的實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)分組及檢測(cè)方法.上海cck8數(shù)據(jù)

對(duì)細(xì)胞毒性??；6、為1瓶溶液,，毋需預(yù)制,，即開即用。 缺點(diǎn).天津cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)計(jì)算

細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在37℃,，5%CO2的條件下)。2.向培養(yǎng)板加入10ml不同濃度的待測(cè)物質(zhì),。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6,12,24或48小時(shí)),。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù)),。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。7.如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值,，打算以后測(cè)定的話,，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基,，去掉***的影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。天津cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)計(jì)算