CCK8實驗操作CCK8的優(yōu)勢在于對細胞沒有毒性,，可以直接加入細胞中長時間孵育,，而不用考慮試劑本身對細胞帶來的影響。1,、向96孔板中每孔加入細胞100ul,，置于培養(yǎng)箱中孵育24小時,，96孔板的排版情況和上述MTT相同,，在這里不重復介紹了。2,、向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液,。如若檢測的細胞增殖或毒性試驗，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當時間,，例如6h/12h/24h等,，然后再加入CCK8檢測液。3,、培養(yǎng)箱中孵育1～4小時,，比較好反應時間以細胞具體顯色程度為準。CCK8雖好,這些情況下不建議用!北京celltiter glo 與cck8

細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定,，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結合流式的雙標準來證明作用效果。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞,，設置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）,、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中,，每孔加入細胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時湖北dojindo cck8使用方法使用方便，省去了洗滌細胞,，不需要放射性同位素和有機溶劑.

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)(在37℃,，5%CO2的條件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響O.D值的讀數(shù)),。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。4.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5.如果暫時不測定O.D值,，打算以后測定的話,，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。在24小時內吸光度不會發(fā)生變化,。細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37℃,，5%CO2的條件下),。CCK8原理、優(yōu)勢和步驟.

,、***濃度的確定需要做一個時間梯度,，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了,。至于說***濃度的確定,，網(wǎng)上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可,。計算方法,，某園子里都有，就不在這里介紹了,。

MTT作用之后,，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內的紫色結晶吸走,。有條件的實驗室,，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出,。如果沒有這種類型的離心機,，可以在測量吸光度的時候，將酶聯(lián)免疫的機器震蕩時間調制5分鐘,，**起碼可以保證沉淀充分溶解,。 對細胞毒性小,；6,、為1瓶溶液，毋需預制,，即開即用。 缺點.北京cck8和mtt的區(qū)別

用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,，可間接反映活細胞數(shù)量,。北京celltiter glo 與cck8

CCK-8的用途1.細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領域都會用到，比如**相關、損傷后修復等,。2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,，經(jīng)常會用到CCK-8。3.細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,，比如在UV,、低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的,，我見過做**的團隊,，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,，比如果子老師所在的團隊,，哈哈哈。5.微生物對細胞的毒性或增殖的實驗北京celltiter glo 與cck8