注意事項1,、細胞密度：MTT要檢測的只是細胞的增殖能力,，所以不用保證孔內(nèi)細胞鋪板一定要均勻,，只要保證孔與孔之間的細胞數(shù)量大致相同就可,，也因此細胞重懸很重要。每孔加入之前,，都需要吹打混勻細胞,，但即便如此也很難保證每個孔的細胞數(shù)量大致一致。所以我們設(shè)置了6組實驗組,，以便計算結(jié)果時可以有所取舍,。2、對于MTT而言,，預(yù)實驗很重要,。預(yù)實驗要摸清楚兩點：a)細胞該如何稀釋；b)***濃度,。網(wǎng)上很多人建議將細胞數(shù)稀釋到某個數(shù)值才是**合適的,，但我認為只要保證每個孔內(nèi)的細胞數(shù)在70%左右,，且各個孔內(nèi)細胞數(shù)量大致相同就可，不需要強求一定要達到某個數(shù)值,，現(xiàn)實中,，這一步需要多次摸索。那它的用途也就大致可以猜到,，和細胞增殖、細胞毒性相關(guān)的實驗都可以,。北京cck8 原理

一直都像個新手,，從未老道過。所有新手的迷茫與無奈我**能體會,?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問有關(guān)CCK8試驗的事情，當初我也和他們一樣,，像個被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進園子里,，期待能找到些解決謎團的只言片語。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實驗室里沒有前行者指點迷津的筒子們,。當然仁者見仁智者見智,，我寫的只是個人實驗心得，就供參考,。歡迎大家拍磚共同進步,。實驗是簡單的，道路是曲折的,，時間就是用來浪費的,，科研就是自娛自樂使勁折騰。湖北cck8 空白組 1640CCK8細胞增殖實驗檢測原理.

CCK-8（CellCountingKit-8）細胞活性和增殖檢測是醫(yī)學(xué)研究中常用的實驗技術(shù),，其原理是該試劑中含有WST-8,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,。以下是CCK-8檢測的具體步驟：細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃,，5%CO2的條件下),。

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會增加空白吸收,，但不影響測定，扣除空白吸收即可,，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外,，血清不影響測定,。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度,，酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾,；

CCK8檢測細胞增殖和毒性實驗佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù),，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機理研究，納米靶向***研究,，**研究整體方案服務(wù),。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,。CCK8系列簡稱終于來了.湖北cck8每次數(shù)據(jù)都不一樣

請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?北京cck8 原理

五,、實驗注意事項：·若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化,。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響。當然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當使用標準96孔板時,，貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。北京cck8 原理