在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育2小時(shí)左右就可以了,。6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度（使用酶標(biāo)儀之前要提前開(kāi)啟10min預(yù)熱）測(cè)定完成后,，保存數(shù)據(jù)。7.連續(xù)五天檢測(cè),，每天保持一樣的時(shí)間點(diǎn)加入CCK-8溶液,，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育時(shí)間相同。注：若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。這個(gè)CCK-8的英文全稱(chēng)是Cell Counting Kit-8.上海cck8曲線(xiàn)

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí)上海cck8曲線(xiàn)在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8.

沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個(gè)試劑盒,。CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到,。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值,，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值。但無(wú)論如何,，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件,。你就算再懶，這個(gè)懶不得,，否則你都只是在做無(wú)用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提，如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。

貼壁生長(zhǎng)的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長(zhǎng)24h了,，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒(méi)人愿意大半夜爬起來(lái)做實(shí)驗(yàn)吧,。3、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來(lái)選擇比較好的時(shí)間,。太長(zhǎng)了就沒(méi)有必要了,，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4,、CCK8試劑加入量,，說(shuō)明書(shū)中明確寫(xiě)出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個(gè)問(wèn)題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致,。本人**終采用的是后者,。5、cck8試劑加入后孵育時(shí)間,，隨著時(shí)間的增加,，OD值就會(huì)增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右,。這里我考察了0.5h、1.0h,、2.0h,。細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 法.

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專(zhuān)注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢(xún)和技術(shù)服務(wù),，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機(jī)理研究，納米靶向***研究,，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.浙江cck8實(shí)驗(yàn)原理曲線(xiàn)

用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。上海cck8曲線(xiàn)

CKK-8原理

CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開(kāi)發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測(cè),，原理與WST-1類(lèi)似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線(xiàn)粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。

上海cck8曲線(xiàn)