CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。5、若暫時(shí)不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。CCK8雖好,這些情況下不建議用!浙江cck8統(tǒng)計(jì)方法小木蟲

注意事項(xiàng)1、細(xì)胞密度：MTT要檢測的只是細(xì)胞的增殖能力,，所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻,，只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，也因此細(xì)胞重懸很重要,。每孔加入之前,，都需要吹打混勻細(xì)胞，但即便如此也很難保證每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致,。所以我們設(shè)置了6組實(shí)驗(yàn)組,，以便計(jì)算結(jié)果時(shí)可以有所取舍,。2、對于MTT而言,，預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要,。預(yù)實(shí)驗(yàn)要摸清楚兩點(diǎn)：a)細(xì)胞該如何稀釋；b)***濃度,。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個(gè)數(shù)值才是**合適的,，但我認(rèn)為只要保證每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右，且各個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,，不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個(gè)數(shù)值,，現(xiàn)實(shí)中，這一步需要多次摸索,。北京cck8 空白組 1640將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。

3、24小時(shí)后,，吸出培養(yǎng)基,，對照組和空白組每孔各加入100ul無血清培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組每孔加入100ul基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的***,，繼續(xù)作用12或24小時(shí),；4、***作用完畢后,，每孔加入50ulMTT,繼續(xù)作用4小時(shí),；5、棄掉每孔中的MTT,，每孔加入150ul的DMSO或異丙醇,。然后震蕩10分鐘，使孔底的紫色結(jié)晶充分溶解,；6,、在酶聯(lián)免疫機(jī)器上測定吸光度，波長為550nm或490nm,。7,、細(xì)胞存活率=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白組吸光度值）/(對照組吸光度值-空白組吸光度值)***。

CCK-8（CellCountingKit-8）細(xì)胞活性和增殖檢測是醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),，其原理是該試劑中含有WST-8,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。以下是CCK-8檢測的具體步驟：細(xì)胞活性檢測1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃,，5%CO2的條件下),?；瘜W(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對細(xì)胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。

MTT實(shí)驗(yàn)操作

1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：

2,、在對照組和實(shí)驗(yàn)組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí)； 加入CCK8那會(huì)空白對照組的細(xì)胞剛好長滿嗎,？天津同仁 cck8

請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?浙江cck8統(tǒng)計(jì)方法小木蟲

二,、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便，省去了洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高,，甚至可以測定較低細(xì)胞密度,；·CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT法，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的,，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解,；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟,，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差,；·CCK-8法對細(xì)胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時(shí)間,，與MTT方法相比線性范圍更寬,，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,，毋需預(yù)制,，即開即用。浙江cck8統(tǒng)計(jì)方法小木蟲