在做每個東西之前,，都要搞清楚這個東西是什么。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進行細(xì)胞計數(shù)的一個盒子,。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實驗都可以,。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中，**主要的化學(xué)藥品是WST-8,，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,。它的**基團和MTT是一樣的，是MTT的升級版本,。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸，有能量代謝）存在的情況下,，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan),。活細(xì)胞越多,，產(chǎn)生的Formazan就越多,，顏色也會越深（如圖1,，來自于Sigma）。CCK-8 反復(fù)凍融會增加背景值,，干擾實驗測定,。天津cck8

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會增加空白吸收，但不影響測定,，扣除空白吸收即可,，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照,。另外,，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時,，多加了這個***劑的濃度,，江蘇cck8 缺點CCK-8試劑中含有WST–8.

經(jīng)驗總結(jié)及分享： 

CCK8的說明書大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問題都有提到,。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價值,，因為那是反復(fù)驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何,，做這個試驗一定要摸條件,。你就算再懶，這個懶不得,，否則你都只是在做無用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗為前提， 如果你做的是促進細(xì)胞生長的***的藥效實驗?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。

摸條件包括1,、種板數(shù)；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長時間,；3、加藥后的孵育時間,；4,、cck8試劑加入量,；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時間,?？雌饋砗芏啵鋵嵾@就是一個實驗,。而且都是種的空白板,，也就是不加***，只加細(xì)胞和CCK8,。

實驗原理：CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進行細(xì)胞增殖和毒性分析。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）.

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度,。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng),，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響,，應(yīng)事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì),，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度,。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,，可以忽略不計,；但如果吸光度很大,，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次,，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測,。 CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.江蘇cck8吸光度值

生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.天津cck8

沒有做過MTT實驗,，但其實原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機理不一樣）,。都說CCK8簡單點而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個試劑盒,。CCK8的說明書大家一定要認(rèn)真閱讀,，里面很多細(xì)節(jié)的問題都有提到,。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價值,，因為那是反復(fù)驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何,，做這個試驗一定要摸條件,。你就算再懶,，這個懶不得，否則你都只是在做無用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗為前提,，如果你做的是促進細(xì)胞生長的***的藥效實驗?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。天津cck8