細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標準來證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細胞,，設(shè)置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).浙江cck8測的是什么

CKK-8原理

CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比,。

上海cck8結(jié)果怎么分析MTT與CCK8區(qū)別是什么?

CCK8檢測原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。3,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。6,、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化,。

cck8試劑加入后孵育時間,，隨著時間的增加，OD值就會增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h,。

再說一下關(guān)于種板設(shè)置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應(yīng)都是不用來做實驗的,。一般每組樣品我會設(shè)置6個復(fù)孔,，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值,。我用的是排***,，會省很多力氣，但是也會增大組內(nèi)誤差,。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了,。

能力有限，表達不清的大家湊合著看看吧,。有疑問的歡迎大家留言討論,，我們的目標是共同進步，哈哈,。 細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,，比如低氧或者什么化學(xué)物品對細胞的影響上。

酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾,；◆細胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間,。實驗二：細胞增殖-毒性檢測1,、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃,，5%CO2）。2,、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì),。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6,、12,、24或48小時）。4,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比,。上海cck8 數(shù)據(jù)分析

培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā),，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基,。浙江cck8測的是什么

細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下),。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響O.D值的讀數(shù))。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。4.用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。5.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話,，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37℃，5%CO2的條件下),。浙江cck8測的是什么